NP-40裂解液

简介：

有很多种成分都可以从细胞中提取蛋白，例如Triton、SDS、NP-40等。NP-40是Nonidet P 40的缩写，也叫乙基苯基聚乙二醇，是一种温和的非离子型去垢剂，1%浓度基本可以破坏掉细胞膜，而对核膜的破坏作用较弱，结合特定的缓冲液可以获得胞浆蛋白。与蛋白结合力强，用于防止物质分子疏水间相互作用，确保蛋白的充分溶解和结构稳定，尤其用于膜蛋白的非变性条件下的溶解。

伊势久NP-40裂解液主要由Tris-HCl、NaCl、NP-40以及sodium pyropho-sphate，β-glycerophosphate，sodium fluoride，EDTA等多种蛋白酶抑制剂组成。经过NP-40裂解液裂解后得到的蛋白，可以用BCA蛋白定量试剂盒和Bradford蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。该产品仅适用于科研实验，不可做他用。

操作步骤（仅供参考）：

(一)贴壁培养细胞

1、 取NP-40 Lysis Buffer置于室温溶解混匀，使PMSF终浓度为1 mM。

2、 去除贴壁细胞的培养液，低速离心，弃上清。

3、 按照6孔板每孔加入150～250 μl含PMSF的裂液的比例，加入NP-40 Lysis。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂15～30 min。

4、 4℃离心（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。

5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)悬浮培养细胞

1、 取NP-40 Lysis Buffer置于室温溶解混匀，PMSF终浓度为1 mM。低速离心悬浮细胞，弃上清液，手机沉淀。

2、 用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～200 μl含有PMSF的裂解的比例，加入 NP-40 Lysis Buffer 。

3、 4℃离心5～10 min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

4、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)组织样本

1、 取NP-40 Lysis Buffer置于室温溶解混匀，使PMSF终浓度为1 mM。把组织剪切成细小的碎片，越小越好。

2、 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30 min以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制之内，以减少蛋白的降解。

3、 按照每20 mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。

4、 4℃离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5、 进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

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