邻硝基苯-Β-D-半乳糖苷(ONPG)

在生物实验研究中使用包括2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷和乳糖的两种底物测量β-半乳糖苷酶活性，通过遵循从2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷释放的邻硝基苯酚的量来测量2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷的β-半乳糖苷酶活性。反应混合物由100μL酶溶液和400μL2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷溶液（2.5g/L，在pH6.8的100mM Tris-HCl缓冲液中）组成，在78度下温育15分钟后，通过加入等体积的1M碳酸钠以终止反应。β-半乳糖苷酶对2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷具有高水解能力（100％），对其天然底物乳糖具有中等活性（25.7％）。然而，酶对所有其他生色硝基苯类似物的水解能力非常弱，表明Gal308是具有窄底物特异性的β-半乳糖苷酶。需要说明的是一个活性单位定义为在测定条件下每分钟产生1μmol邻硝基苯酚所需的酶量，比活性表示为每毫克蛋白质的单位。在含有100μL酶溶液和5％乳糖的相同缓冲液中进行对乳糖活性的测定，并通过煮沸10分钟终止反应，并使用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶测定试剂盒测定葡萄糖浓度。[1]