线粒体柠檬酸（MCA）检测试剂盒（微量法 100T/96S）

线粒体柠檬酸（Mitochondrion citric acid, MCA）含量试剂盒说明书 

微量法 100 管/96 样 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 

测定意义： 

MCA 是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰 CoA 与草酰乙酸合成，其含量 是三羧酸循环强度的主要指标之一。 配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 MCA 含量，其中（1）丙 酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶 活性和乙酰 CoA 含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰 CoA 情况，（3）乙酰 CoA 含量、柠檬 酸合酶活性和 MCA 含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

测定原理： 

MCA 在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反 应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出 MCA 的含量。

自备仪器和用品：

分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研钵、蒸馏水。 

线粒体中柠檬酸提取：

称 0.05~0.1g 样品（建议称 0.1g 样本），加入 0.5ml 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃离心 5min； 取上清至另一 EP 管中，11000g/min 4℃离心 10min，弃上清（取 300μl 该上清液和 300μl 碱性提取液中和 后可用于细胞质 CA 含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入 0.5ml 酸性提取液，充分悬浮溶解，超声 波破碎（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），取此溶液 300μl 和 300μl 碱性提取液中和，混 匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。