NCIH69人小细胞肺癌细胞

NCIH69人小细胞肺癌细胞

 基本特性:

种属来源:人

性别年龄:55岁，白人男性

组织来源:肺

生长特性:悬浮生长

细胞形态:淋巴母细胞样

细胞规格:1 X 106cells/T25或1 mL冻存管

培养条件:RPMI1640 +10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1:3传代, 2-3天传1代

细胞特性：

基础档案

组织来源：SCLC患者骨髓转移灶（广泛期）

病理特征：

经典小细胞形态（高核质比，染色质"椒盐"样）

神经内分泌标志物：Synaptophysin+++/CD56++/Chromogranin A+

分子特征谱：

1. 核心驱动变异

基因  变异类型  临床意义

TP53  R273H（DNA结合域）  基因组不稳定性

RB1  Exon17移码缺失  细胞周期失控

DLL3  膜高表达（流式>95%）  靶向治疗靶点（Rova-T）

MYCL1  低水平扩增（FISH 3-4 copies）  区别于H82细胞系

表观遗传特征：

flowchart LR

A[ASCL1高表达] --> B[神经内分泌分化]

C[EZH2过表达] --> D[全局H3K27me3升高]

E[SLFN11低表达] --> F[拓扑替康耐药]

培养标准化方案：

经典培养体系

参数  标准条件  神经球培养优化

基础培养基  RPMI-1640 + 10% FBS  Neurobasal-A + B27

关键添加剂  0.1mM β-巯基乙醇  20ng/mL EGF/FGF2

传代方法  机械吹散+40μm滤网  悬浮传代（不消化）

冻存复苏  程序冻存（-1℃/min）  CryoStor CS10

 关键质控点：

细胞团处理：

短暂低浓度胰酶（0.025%）提高单细胞率

DNA酶I（100U/mL, 5min）解聚大团块

支原体防控：

每月MycoAlert检测（阈值RLU≤1.0）

预防性使用BM-Cyclin（5μg/mL交替）

功能验证：

每3代检测Synaptophysin表达（IF）

化疗敏感性测试（依托泊苷IC50≤100nM）

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10? cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。