脂肪酸合成酶（FAS）检测试剂盒（分光光度法50T/48S）

脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书 

分光光度法 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 

测定意义：

FAS 是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶 A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达于各 种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。 

测定原理：

FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP +；NADPH 在 340nm 有吸收峰， 而 NADP +没有；通过测定 340nm 光吸收下降速率，计算 FAS 活性。

FA009-50T/48S: 

试剂一：液体 50ml×1 瓶，－20℃保存。用前 1 d 取出置于 4℃充分解冻后混匀。

试剂二：粉剂×1 瓶。临用前加入 1100 μl 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻 融。 试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 1100 μl 

试剂三，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存， 禁止反复冻融。 试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 2100μl 

试剂五，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存， 禁止反复冻融。 

自备仪器和用品： 

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1ml 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。 

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂 一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 40min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加 入 1ml 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 12000g， 4℃，离心 40min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。 

FAS 测定操作： 

1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。 

2. 试剂四置于 40℃水浴中预热 30 min。

3. 测定管：在 1ml 石英比色皿中依次加入 100μl 上清液、20μl 试剂二、20μl 试剂三、820μl 试剂四和 40μl 试剂五，迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和 90s 时吸光值，分别记录为 A1 和 A2。△A 测 =A1-A2。