脂肪酸合成酶（FAS）测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

脂肪酸合成酶（FAS）是生物体内脂肪酸合成的关键酶，主要功能包括：脂肪合成：催化乙酰-CoA和丙二酸单酰-CoA合成脂肪酸能量储存：将多余能量转化为脂肪储存，维持能量平衡信号调节：调控细胞增殖、分化和凋亡疾病关联：FAS过度表达与肥胖、糖尿病、癌症等疾病密切相关药物靶点：FAS抑制剂可用于治疗肥胖、代谢综合征和某些癌症

测定原理

采用紫外分光光度法检测FAS活性，反应式如下： 乙酰-CoA+7丙二酸单酰-CoA+14NADPH+14H+→FAS棕榈酸+7CO2+8CoA+14NADP++6H2O乙酰-CoA+7丙二酸单酰-CoA+14NADPH+14H+FAS棕榈酸+7CO2+8CoA+14NADP++6H2O 通过监测NADPH在340nm处吸光度下降速率计算FAS活性。

自备仪器与试剂

必备仪器

紫外分光光度计/酶标仪（340nm检测通道）

台式高速离心机（≥12000g）

恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）

可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）

超声破碎仪（用于细胞/细菌样本）

必备耗材

1mL石英比色皿/96孔紫外板

离心管（1.5mL、10mL）

一次性无菌吸头

研钵/组织匀浆器（冰浴专用）

自备试剂

蒸馏水/去离子水

生理盐水（用于样本稀释）

液氮（用于样本速冻）

样本前处理方法

动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取0.1g组织，加入1mL预冷提取液，冰浴匀浆12000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测若酶活性过高，可用提取液稀释1-5倍后测定

血清/血浆样本血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取血清上清血浆样本：加入抗凝剂（肝素/EDTA）后3000g 4℃离心10min，取上清样本可直接检测，无需提取处理；活性过高时可用生理盐水稀释

细胞/细菌样本收集对数生长期细胞/细菌，8000g 4℃离心5min弃上清加入1mL预冷提取液重悬，冰浴超声破碎（功率20%，超声3s/间隔10s，重复30次）12000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测

测定操作步骤

紫外分光光度法操作

试剂准备：

试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存

试剂二：粉剂×1支，-20℃避光保存，用时加550μL蒸馏水溶解（现配现用）

试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存，用时加550μL蒸馏水溶解（现配现用）

工作液：试剂一900μL + 试剂二50μL + 试剂三50μL，现配现用

预温育：

分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零

工作液置于37℃水浴中预热10min

反应启动：

取比色皿，依次加入：工作液900μL + 样本100μL

混匀，在340nm波长下记录0min（A1）和5min（A2）时的吸光度值

计算ΔA：ΔA = A1 - A2

微量法（酶标仪）操作96孔板每孔加入：工作液90μL + 样本10μL37℃预温育5min，加入样本后立即混匀设置动力学模式，340nm处连续读取10个循环（每1min读取1次）计算吸光度下降速率（ΔA/min）

酶活力计算方法

单位定义

U/g鲜重：每g组织鲜重每分钟氧化1μmol NADPH的酶量

U/mL：每mL样本每分钟氧化1μmol NADPH的酶量

U/mgprot：每mg蛋白每分钟氧化1μmol NADPH的酶量

计算公式

FAS活性(U/mgprot)=ΔA×V反总×V样总ε×d×Cpr×V样测×TFAS活性(U/mgprot)=ε×d×Cpr×V样测×TΔA×V反总×V样总

ΔA：5min内吸光度变化值

V反总：反应体系总体积（1.0mL）

V样总：样本提取液总体积（mL）

ε：NADPH摩尔消光系数（6.22×10³ L/(mol·cm)）

d：比色皿光径（1cm）

Cpr：样本蛋白浓度（mg/mL）

V样测：测定时加入样本体积（0.1mL）

T：反应时间（5min）

简化公式

组织样本：FAS（U/g鲜重）= 0.322 × ΔA ÷ W

液体样本：FAS（U/mL）= 0.322 × ΔA

蛋白样本：FAS（U/mgprot）= 0.322 × ΔA ÷ Cpr

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免酶失活；-80℃可保存1个月

匀浆与超声破碎需在冰浴中进行，控制温度在0-4℃

避免样本接触金属离子，可用EDTA螯合

试剂使用：

试剂二、三需现配现用，-20℃分装保存可稳定1个月

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

工作液需现配现用，避免NADPH氧化

测定过程：

反应温度严格控制在37℃（最适温度）或25℃（其他物种）

若ΔA值大于0.5，需稀释样本后重新测定

每个样本需设置3个平行孔，取平均值计算

质量控制：

每次实验设置空白对照（提取液替代样本）和阳性对照

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质、样本处理是否正确

实验前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验

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