ER-Tracker Green, for live-cell imaging 内质网绿色荧光探针的使用说明

产品描述

ER-Tracker Green是一种药物荧光偶联物，即BODIPY™ FL标记的格列苯脲（BODIPY™ FL Glibenclamide）。

格列本脲，又名优降糖（Glyburide），是一种磺酰脲类口服降糖药，用来调查胰岛素β细胞活性和胰岛素分泌，以及研究心肌细胞功能和心律失常。

格列本脲能够结合内质网上突出的ATP敏感性钾通道（KATP）的磺脲类受体。格列本脲的药理学活性可能影响内质网功能。

某些特定细胞上磺脲类受体的可变表达可能引起非内质网标记。激发/发射波长~504/511nm，光谱特性类似于传统的FITC，与检测该染料的标准滤片兼容。

参数信息

英文名称：ER-Tracker Green for live-cell imaging

分子式：C37H42BClF2N6O6S

分子量：783.0952

状态：液体

Ex/Em：504/511nm

检测滤片：FITC

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

注意事项

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 

格列本脲的药理学活性可能会影响内质网的一些功能；某些特殊细胞中磺脲类受体的可变表达可能会导致非内质网特异性染色。

ER-TrackerGreen可用于活细胞内质网的荧光染色，但不适合用于固定细胞内质网的荧光染色。

如果经ER-TrackerGreen染色后的细胞需要进行固定操作，使用4%多聚甲醛在37C固定2分钟。

ER-Tracker Green染色后的细胞不能用TritonX-100通透，TritonX-100通透处理会导致ER-TrackerGreen的荧光染色消失。

使用说明

1.ER-Tracker Green工作液的配制:

a.取少量ER-TrackerGreen按照1:100o的比例加入到ER-Tracker

Green稀释液中。例如取1μlER-Tracker Green加入到1ml ER-TrackerGreen稀释液中。混匀后即为ER-Tracker Green工作液。

b.ER-TrackerGreen工作液使用前需37°C预温育。

【注】：工作液中ER-TrackerGreen的浓度可以根据实际情况进行调整，稀释比例调整范围为1:1000-1:3000。

为降低背景，在染色效果可以接受的范围内，建议尽量使用较低浓度的ER-Tracker Green。

2.内质网的荧光标记：

a.去除细胞培养液，用溶液如HBSSwith Ca2+&Mg²+(Hanks'Balanced Salt Solutionwith Ca²+&Mg²+)洗涤生长在盖玻片上的细胞。

注:对于悬浮细胞的染色可以参考贴壁细胞的染色方法进行。

b.去除洗涤液，加入步骤1配制好的并37C预温育的ER-Tracker Green染色工作液，与细胞37C共孵育15-30分钟。

c.去除ER-TrackerGreen染色工作液，用细胞培养液洗涤细胞1-2次。

d.随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到内质网呈明亮的强荧光染色。

e.如果经ER-TrackerGreen染色后的细胞需要进行固定，可以使用4%甲醛37°C固定2分钟。固定后用洗涤液洗涤2-3次，每次5分钟，随后可以进行复染或滴加适当的抗荧光淬灭封片液，封片观察。

【注】：ER-TrackerGreen染色的细胞不能用TritonX-100通透，TritonX-100通透处理会导致ER-TrackerGreen的荧光染色消失。