GST标签蛋白纯化试剂盒

品名：Super-GST™ GST 蛋白纯化 Kit，货号：P0007，品牌：Engibody

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)

保姆级GST 蛋白纯化试剂盒

Super-GST™ GST 标签蛋白纯化试剂盒的优势
 
1、本试剂盒中包含特殊配方的雷霆细菌裂解液，可快速裂解大肠杆菌并完全释放可溶型GST标签蛋白及包涵体（无需超声破菌，无需加热，快速温和，完全裂解。盒内裂解液5-10分钟内即可高效裂菌并完全释放GST标签融合蛋白）。
 
2、本试剂盒可以通过温和的、非变性的洗脱条件得到目的蛋白。最大程度保留蛋白活性。
 
3、试剂盒中的GSH填料可以重复使用10次以上。
 
4、本试剂盒是一个Complete All-In-One Kit — 包含全部试剂，高效细菌裂解液、平衡缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、洗脱剂、GSH填料、重力空柱（带控流阀）以及下游WB检测所需的高特异性GST小鼠单抗。




让GST蛋白纯化变得简单高效！


第一部分：背景简介及应用场景
 
谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是一个由211个氨基酸组成的大小为26kDa序列，它是一种广泛使用的可提高靶蛋白的溶解度亲和标签。GST标签与固定化的谷胱甘肽GSH具有亲和力，常用于原核表达。它可以与一个蛋白的N端或C端融合。
 
谷胱甘肽亲和是一种有效的一步纯化GST(谷胱甘肽S-转移酶)标签蛋白的方法。GST可作为一种可溶性蛋白在大肠杆菌细胞质中大量表达，并具有完全的酶活性。此外，许多在大肠杆菌中表达时不溶的真核蛋白，在表达为GST标签蛋白时被证明至少部分可溶。
 
重组标签蛋白纯化利用谷胱甘肽GSH的结构能够和GST（谷胱甘肽S-转移酶）结合位点互补,谷胱甘肽偶联在琼脂糖介质上,带有GST的标签蛋白与琼脂糖介质上交联的谷胱甘肽配体互补性结合,这种可逆性的结合在温和、非变性的条件下通过参加还原型谷胱甘肽竞争性洗脱下来,杂质通过洗涤缓冲液被去除,从而纯化富集目的蛋白。
 
GST 标签纯化蛋白的优点
1）、GST标签蛋白能提高蛋白的溶解度，可把一些难溶蛋白变成可溶性蛋白，使实验变得具有可行性。
2）、GSH谷胱甘肽偶联磁珠亲和力强，洗脱纯度高，且是非变性、温和、竞争性洗脱，有利于保持蛋白活性。
3）、可用蛋白酶进行去除。
4）、适用范围广，可在不同宿主中高效表达。
5）、一般来说，使用一步纯化出的GST标签蛋白纯度高于一步纯化出的His标签蛋白纯度。
 
GST 标签纯化蛋白的缺点
1）、融合表达的GST标签，肽链较长，大到26kD，可能会改变目的蛋白的天然构象。
2）、仅能纯化可溶性蛋白，若蛋白不可溶，则很难用变性的方法纯化。因为一旦将目的蛋白变性，则GST标签也会被变性，那么就会失去生物活性，也就无法结合GSH填料了。

第二部分：技术原理
 
无论是大肠杆菌或者其他宿主细胞中，天然表达的还是重组表达的，各种来源的GST标签蛋白，都可以用固定的谷胱甘肽亲和层析法纯化，然后用过量的还原性谷胱甘肽GSH竞争洗脱。使用以琼脂糖凝胶为基质的Glutathione Agarose Resin 6FF介质，可以在相对较高流速的情况下，实现对目的蛋白的纯化。此介质通过标签与配体结合，缓冲液洗脱去除杂质，然后标签蛋白在温和且非变性的条件下被洗脱，使得蛋白的抗原性能和功能活性得到保护。
 
GST标签的去除
如果GST标签需要切除，包含 PreScission 蛋白酶识别位点、Thrombin识别位点或Factor Xa识别位点的标签蛋白可以在与GSH填料柱结合时或在洗脱后进行标签去除。一般来说，柱上切割是推荐的方法，因为许多潜在的杂质都能被洗掉，目的蛋白洗脱时具有更高的纯度。如果切割条件需要优化，建议在洗脱后进行标签去除。
 

第三部分：技术流程
 
 

第四部分：实验结果与示例展示
 
 

图注如下：
GST-tagged protein purification from whole cell extracts. Whole cell extracts containing GST-DHFR (left) and GST alone (right) were loaded, washed, and eluted from glutathione resin columns. Then, the resulting purification fractions were analyzed by SDS-PAGE (A & B) and Western blot with an anti-GST IgG (C & D).

第五部分：GST 蛋白纯化试剂盒组分清单
（共计10个组分，均可单独购买）
 

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)