蛋白互作GST Pull-Down试剂盒

GST Pull-Down Kit

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上海更新日期：2024-09-28

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产品详情:

中文名称：: 蛋白互作GST Pull-Down试剂盒

英文名称：: GST Pull-Down Kit

品牌：: Engibody

产地：: 美国

产品类别：: 蛋白互作研究产品

品名：Smart-GST™ GST Pull-Down Kit，货号：IF9604，品牌：Engibody

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)

NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校课题组青睐并长期采购的GST Pull-Down试剂盒！

Smart-GST™蛋白互作GST Pull-Down试剂盒

Smart-GST™ GST Pull-Down试剂盒的四大优势

1、本试剂盒适用于细胞蛋白体外互作、组织蛋白体外互作、纯化重组蛋白体外互作以及这三类蛋白之间互作的研究。

2、本试剂盒用于验证两个已知蛋白的相互作用，也可以用于筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。

3、本试剂盒完美衔接下游实验（Western Blotting、MS质谱）。

4、本实验手册是一本GST Pull-down实验的全面技术手册，透彻分析了GST Pull-down实验中的重点、难点，对各种重点难点问题都有针对性的解决方案。同时包含了蛋白互作研究的基础知识和经典数据库信息，有了这本保姆级使用手册，所有疑难都会迎刃而解，GST Pull-down尽在掌握之中。

第一部分：背景简介及应用场景

GST pull down是将已知蛋白与GST融合，而该融合蛋白通过GST标签与谷胱甘肽GSH磁珠亲和结合。简单来说，我们假定X蛋白和Y蛋白可能存在互作，将纯化的融合GST的X蛋白和纯化的Y蛋白以及能特异性结合GST的谷胱甘肽GSH磁珠混合在一起孵育一定时间，然后洗去未结合的蛋白，并洗脱诱饵蛋白X及猎物蛋白Y，随后进行SDS-PAGE电泳。通过Western Blot检测结果，可以看到GST-X蛋白和Y蛋白所对应的条带，即表明了X蛋白和Y蛋白因发生相互作用而被GST-X pull down。

备注：可以在下游衔接Western Blot、MS质谱等实验。其中Western Blot用于验证已知的互作蛋白，MS质谱用于筛选发现未知的互作蛋白。

1、GST Pull-down和CoIP，这两种最经典蛋白-蛋白互作技术的区别是什么？
1)、GST Pull-down———GST 标签融合蛋白与猎物蛋白pull-down，In Vitro体外研究蛋白互作PPI的经典方法。将目的蛋白序列加上GST或His标签序列进行基因合成并构建重组质粒，转化大肠杆菌后表达纯化蛋白，再将GST 标签融合蛋白固定于GSH磁珠上作为诱饵蛋白，然后去拉取与之结合的猎物蛋白。

2)、CoIP———蛋白免疫共沉淀，In Vivo体内研究蛋白互作PPI的经典方法，保留在靶标细胞/组织内的天然构象蛋白互作的真实情况，可以用于验证已知蛋白也可以用于筛选发现未知蛋白。

2、在下列两种情况下GST Pull-down是不可替代和不可或缺的：
1)、诱饵蛋白找不到CoIP级的抗体，而GST Pull-down不需要CoIP级的免疫捕获抗体，正好克服了这个难题。

2)、目的蛋白所在的研究对象（比如真菌等）无法采用普通的标签质粒转染、转化的方法进行外源标签融合蛋白的过表达，也找不到内源蛋白的抗体，这时便无法实施CoIP实验，因此GST Pull-down就是这类情况下研究蛋白互作的唯一选择。

3、GST Pull-down的优点
1)、鉴定的蛋白是直接作用的蛋白，而不是间接作用的多个猎物蛋白复合物；
2)、GST标签蛋白可把一些难溶蛋白提高溶解度变成可溶性蛋白，使实验变得具有可行性；
3)、GSH谷胱甘肽偶联磁珠亲和力强，洗脱纯度高，且是非变性、温和、竞争性洗脱。

4、GST Pull-down的缺点
1）、验证互作是在离心管中进行的体外反应，不能够完全反映细胞内蛋白真实互作的生理状态；
2）、融合表达的GST标签，肽链较长，大到26kD，可能会改变目的蛋白的天然构象。

第二部分：技术原理和技术流程
技术原理：

基本原理是将靶蛋白与GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）的融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽（GSH）标记的磁珠上,作为与目的蛋白结合捕获的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液与之孵育,可从中捕获与之相互作用的“猎物蛋白”(目的蛋白), 洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳，随后可以进行下游的WB检测或者质谱分析, 从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,“诱饵蛋白”和“猎物蛋白”均可来自于细胞裂解物、组织裂解物或纯化的重组蛋白（重组蛋白可以通过大肠杆菌等表达系统或者体外转录翻译系统获得）。此方法简单易行, 操作方便。

技术流程：
GST Pull-down

第四部分：实验结果与示例展示

GST Pull down实验仅仅是从样本中捕获富集特定目的蛋白的过程，必须衔接下游实验才能得出有价值的结果。最常见的下游实验是WB实验：

Western blotting (WB，或称为IB)
用于两个已知蛋白互作验证（In Vitro体外实验）

GST Pull-down

第五部分：GST Pull Down试剂盒组分清单
（共计10个组分，均可单独购买）

编号	组分名称	数量	保存	注意事项
下列组分收到后需储存在 4 °C中，磁珠千万不要冷冻。
IF9302	Glutathione Magnetic Beads for GST Pull-Down Assay	5 mL	+4 °C	不能冷冻磁珠不能干燥磁珠不能高速离心磁珠
PULL-01	Binding Buffer for pull-down	50 mL	+4 °C
PULL-02	Wash Buffer for pull-down	120 mL	+4 °C
PULL-03	Elution Buffer for pull-down	100 mL	+4 °C	非变性洗脱液，用于衔接下游WB及MS
PULL-04	TCEP	250mg	+4 °C
下列组分收到后需储存在室温中
IF9217	QuickStain™ One-Step Protein Gel (PAGE) Blue Stain 蛋白PAGE胶快速染色液（用于显示蛋白条带及MS质谱）	50mL	室温	超快染色蛋白胶，灵敏度极高，10分钟即可让低至10ng的蛋白显示条带
PULL-04	还原型谷胱甘肽	307 mg	室温	按需称取溶解，易于氧化失效
下列组分收到后必须要储存在 -20 °C中
AT0025	Anti-His小鼠单克隆抗体	25 µL	-20 °C	用于下游WB检测
AT0027	Anti-GST小鼠单克隆抗体	25 µL	-20 °C	用于下游WB检测
AT0098	山羊抗小鼠二抗HRP标记	100 µL	-20 °C	用于下游WB检测

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)

Pull-down;GST;蛋白互作;体外蛋白互作;

公司简介

复名表观遗传学（上海复名医疗科技有限公司），专注于表观遗传学研究工具的开发和表观技术服务的提供。经过多年和全球著名大学表观研究领域专家教授的交流和探讨，积累经验，精准解决表观研究工具领域的痛点难点，在表观基因组学、表观转录组学和表观蛋白组学领域均开发了一系列研究试剂盒并提供表观技术服务，和哈佛大学，华盛顿大学，斯坦福大学，麻省理工学院，UCSC，UCSF，HHMI，德国海德堡大学，法国国家健康与医学研究院inserm等世界名校均建立了密切的合作和交流，所开发的抗体，试剂，试剂盒受到了全球客户的欢迎。 Engibody为复名表观遗传学旗下品牌，所开发的抗体，试剂，表观试剂盒在全球范围内销售，受到众多世界著名大学课题组老师及医药500强巨头的认可和喜爱。公司地址: 上海市嘉定区嘉定工业区永盛路1218号金元大厦908室。订购请咨询：13817407320(微信同号)

成立日期	(6年)
注册资本	200万
员工人数	1-10人
年营业额	￥ 100万-300万
经营模式	试剂,服务
主营行业	抗体,癌症研究,蛋白组学,分子生物学,细胞生物学