D-荧光素钾盐

       保质期：一年

       储存条件：-20℃避光保存

　　分子式：C11H7N2KO3S2

　　分子量：318.41

　　Ex(nm)：328

　　Em(nm)：533

　　操作方法

　　以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子，它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。

　　1.用于体外生物发光图像测定的实施方案

　　1.1在无菌水中制备100mM(100-200X)荧光素原液、混合均匀，立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20°℃，避免冻融循环，避免暴露在光线下。

　　1.2在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。

　　1.3从培养细胞中分离培养基。

　　1.4将荧光素工作溶液加入细胞中，并在成像前将细胞在37℃孵育5-10分钟。

　　2.用于体内生物发光图像测定的实施方案

　　2.1在DPBS中制备15mg/mL荧光素储备溶液，不含镁离子和钙离子，混合均匀。

　　2.2过滤器通过0.2um过滤器过滤灭菌溶液。立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20℃，避免冻融循环，避免暴露在光线下。

　　2.3在动物体重150mg/kg(或10uL/g荧光素储备溶液) 成像***-15分钟腹膜内(i.p.)注射荧光素

　　注意：应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究，以确定峰值信号时间。

　　3.荧光素报告分析分子测定的实施方案

　　3.1在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20℃，避免冻融循环，避免暴露在光线下。

　　3.2制备1mM D-荧光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO 4的25mM tricina缓冲液。pH7.8。

　　3.3将5-10ul细胞裂解夜移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白。

　　3.4根据制造商的说明，使用荧光素工作溶液的普利光度计。

　　3.5注入200μl荧光素工作溶液，无延迟，10秒积分时间。

　　注意1：D-荧光素钾盐溶于无菌水和缓冲液，溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用，D型转化为L型)的情况下，D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气，将加速D-荧光素钾的降解速度。储备溶液可以在不含ATP的水中制备，并在-20℃下避光储存。必须用适当的碱中和游离酸溶解

　　注意2：D-荧光素可与任何现有的文献或ATP分析系统一起使用。

　　注意3：如果检测ATP，请戴上手套并使用无ATP容器，尽量减少所有可能的ATP污染源。只使用无菌无ATP水和试剂。使用高压灭菌水进行所有试剂制备。