甲型流感（禽流感）病毒H5N8亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

本品产仅供科研

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产品名称：甲型流感（禽流感）病毒H5N8亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品规格：50次/盒

本产品就是根据PCR原理专门开发的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

3. 产品精心优化且特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟除此之外的其它微生物DNA发生交叉反应。

4. PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5. 本产品足够50次20μL体系的PCR反应。

6. 本产品只能用于定性实验，不能用于定量。

7. 本产品只能用于科研

甲型流感（禽流感）病毒H5N8亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒样品的制备　
1. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 牛乳头瘤病毒 PCR 阳性对照（1×10E6 拷贝/μL，本试剂盒提供）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。

2. 用自选方法纯化上述 N+2 个样品的 DNA。本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。

电泳分析　

1. 取 5-10uL 扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用 1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。

2. 阳性样品预期得到的扩增产物长度为 200bp 左右。如果两个阴性对照（样品制备阴性对照或 PCR 阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。

3. 如果所有样品和 PCR 阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂、设备、程序、操作等），需要重复并排查原因。

4. 如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2 个样品中有扩增产物的判定为阳性，无则判定为阴性。

甲型流感（禽流感）病毒H5N8亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒样本采集、存放及运输：

1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；

2、运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限一年。阳性对照需单独放置，不要污染其他试剂。

3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。

4、自备试剂：样品DNA。

甲型流感（禽流感）病毒H5N8亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒注意事项

1 所有操作严格按照说明书进行；

2试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；

3 反应液应避光保存；

4反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

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