品名：Smart-ChIP™ ChIP Kit，货号：ChIP-1001， 品牌：Engibody
NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校课题组青睐并长期采购的ChIP试剂盒！
Smart-ChIP™ ChIP保姆级试剂盒（磁珠法）的五个巨大优势
1、本试剂盒适用于贴壁细胞、悬浮细胞、动物组织及植物组织，均有针对性的详细步骤可以处理这些样本类型，是个真正的多合一Kit。
2、本试剂盒包含需要交联处理的转录因子类Cross-linked ChIP（超声法，蛋白-DNA弱结合）的全部试剂。
3、本试剂盒还包含无需交联处理的组蛋白修饰类Native ChIP（MNase酶切法，蛋白-DNA强结合）的全部试剂。
4、本试剂盒包含了三大ChIP下游实验（PCR、qPCR以及NGS二代测序）的完整实验操作方案和数据分析方案，同时本ChIP Kit中还包含了荧光定量PCR全部试剂。
5、本说明书是一本ChIP实验的全面技术手册，透彻分析了ChIP实验中的重点、难点，对各种重点难点问题都有针对性的解决方案。同时包含了表观遗传学的基础知识和基本脉络，汇总了各种组蛋白修饰类型的详细信息。看完这本保姆级说明书，所有疑难都会迎刃而解，ChIP尽在掌握之中。
保姆级ChIP试剂盒
一盒在手，ChIP无忧！
第一部分：背景简介及应用场景
染色质免疫沉淀 (ChIP) 技术方法是一种用于在细胞天然染色质背景下探测蛋白质-DNA 相互作用的强大技术。这种方法可以用于检测特定转录因子与基因组某个启动子元件的结合水平，也可以用于检测整个基因组范围内位点上某种特定组蛋白修饰水平。染色质免疫沉淀是理解染色体的一种革命性工具，使研究者可以了解染色质及其相结合的调控因子之间的时空动态相互作用。
除了组蛋白和转录因子以外，ChIP 技术还可用于分析转录辅助因子、DNA 复制因子及 DNA 修复蛋白与DNA特定区域的结合情况。进行 ChIP 实验时，在得到特异性富集的genomic目的DNA片段后，可以在下游衔接标准 PCR实验、定量实时 PCR实验或者NGS二代测序。其中ChIP-qPCR和 ChIP-sequence功能尤为强大，最为常用。
1、ChIP和EMSA、DNA Pull-down、DAP-seq，这四种研究DNA-蛋白互作技术的内在关系是什么？
EMSA———电泳凝胶迁移阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay)，In Vitro体外通过DNA探针检测目的蛋白，反向验证了ChIP。是经典方法。
DNA Pull-down———In Vitro体外通过DNA探针捕获目的蛋白或其他候选蛋白，获取蛋白后进行WB检测或MS质谱鉴定。也是经典方法。
DAP-seq———DNA亲和纯化测序，使用表达纯化得到的重组靶蛋白（例如重组转录因子）捕获样本中与之相结合的所有genomic DNA片段，本质上可以理解为In Vitro体外 ChIP，适用于没有合适ChIP抗体的情况，同时这种技术的另一个独特优势是可以在全基因组范围内Genome wide快速筛选得到可能和靶蛋白相结合的全部基因组DNA片段。这是近年来的新兴技术。
2、ChIP和CUT&RUN、CUT&Tag，这三种DNA-蛋白互作技术之间的比较
CUT&RUN、 CUT&Tag都是研究DNA和蛋白互作的新技术，是2017年由美国弗雷德癌症中心的Henikoff教授开发的新技术，受到广泛关注，这个技术是ChIP技术的强大补充，适用于低细胞用量的实验，只需要100个-10万个细胞的样本即可实施实验，而ChIP需要百万级细胞才能实施。所以CUT&RUN、 CUT&Tag对于难以获得足够细胞样本的实验者来说是个好消息，但是这两种新技术虽然原理巧妙，但操作步骤较为复杂，试剂盒较贵，而且因为是全程微量操作，需要添置不少专门的仪器设备（Qseq 100或安捷伦bioanalyzer 2100等）。对于不难获得样本细胞的实验者而言，传统经典ChIP技术仍然有其不可替代的独特优势，操作较为简单，步骤成熟，无需额外添置昂贵的专门仪器，实验成本大大降低。
3、ChIP-seq和RNA-seq的联合分析
这是经典研究策略，让ChIP-seq的转录调控环节与最终细胞内mRNA实际水平进行比较，互相印证。
第二部分：技术原理和技术流程
技术原理：
染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChIP）的基本原理是在活细胞状态下把细胞内的蛋白质和DNA交联，超声波或酶切将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后用所研究的目的蛋白质抗体免疫沉淀蛋白质-DNA复合体，从而特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，以便用于下游的PCR分析和Sequence测序。
ChIP-qPCR用于检测通过蛋白特异性免疫沉淀富集得到的特定 DNA 序列的相对数量。ChIP-sequence能对蛋白-DNA 相互作用和组蛋白修饰进行全基因组范围内的分析。
两大技术路线：
因为：甲醛交联后的染色质对限制性内切酶、MNase及DNase I高度抵抗，不易被酶切断。通常需要使用超声波来物理打断染色质。
所以：根据实验者研究的目的蛋白不同，采用2种不同的技术路线
1、如果研究的是转录因子，转录因子和启动子DNA元件的结合一般都是弱结合，是容易解离的，且转录因子在细胞内的丰度较低，所以一般采用甲醛固定交联转录因子和DNA，超声打断得到染色质小片段的技术流程。
2、如果研究的是组蛋白甲基化或乙酰化修饰，细胞内丰度较高，且DNA缠绕在组蛋白上，是相对强结合，不易解离，因此一般无需甲醛固定交联，MNase (Micrococcal Nuclease) 酶切即可得到染色质小片段。
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第三部分：ChIP试剂盒组分清单
（共计19个组分，均可单独购买）
| 编号 | 组分名称 | 数量 | 保存 | 注意事项 |
| 下列组分收到后需储存在 4 °C中，磁珠千万不要冷冻。 |
| IF0002 | ChIP级Protein A/G 磁珠
(单链鲑鱼精DNA预包被) | 1 mL*2 | +4 °C | 不能冷冻 |
| ChIP-001 | 10×交联终止剂 | 48 mL | +4 °C |
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| ChIP-002 | Chromatin Extract Buffer | 24 mL | +4 °C |
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| ChIP-005 | ChIP Wash Buffer 1 | 24 mL | +4 °C |
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| ChIP-006 | ChIP Wash Buffer 2 | 24 mL | +4 °C |
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| ChIP-007 | ChIP Wash Buffer 3 | 24 mL | +4 °C |
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| ChIP-008 | ChIP Wash Buffer 4 | 24 mL | +4 °C |
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| ChIP-009 | ChIP Elution Buffer | 7.2 mL | +4 °C | 如有絮状物，使用前需要置室温恢复溶解 |
| ChIP-011 | TCEP | 572 mg | +4 °C | 使用前配制，工作终浓度为50 mM |
| 下列组分收到后必须要储存在 -20 °C中 |
| ChIP-017 | MNase 微球菌核酸酶 | 30 µL | -20 °C |
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| ChIP-003 | 1×Cleavage Buffer | 3 mL | -20 °C |
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| ChIP-004 | 0.5M酶切终止剂 | 1.5 mL | -20 °C |
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| ChIP-018 | RNase A (10 mg/mL) | 100 µL | -20 °C | 使用时需要加入钠盐 |
| ChIP-019 | Proteinase K (20 mg/mL) | 100 µL | -20 °C |
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| ChIP-012 | DNA沉淀增强物 | 100 µL | -20 °C |
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| ChIP-010 | ChIP专用盐溶液 | 1.5 mL | -20 °C |
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| ChIP-020 | 2×热启动荧光定量PCR Master Mix套装（含有ROX I,ROX II各100µL） | 1.25 mL*2 | -20 °C |
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| ChIP-021 | ChIP级Normal Mouse IgG
阴性对照 | 200 µL | -20 °C |
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| ChIP-022 | ChIP级Normal Rabbit IgG
阴性对照 | 200 µL | -20 °C |
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实验结果展示：
1、ChIP-PCR
2、ChIP-qPCR
3、ChIP-测序
Smart-ChIP™ ChIP kit 保姆级ChIP试剂盒官网详细页面：
https://www.engibody.com/products/Smart-ChIP-ChIP-Kit.html
注意：本试剂盒仅用于科学研究，不用于临床诊断。
订购请咨询：13817407320(微信同号)
