aladdin 阿拉丁 D598099 DNA凝胶回收试剂盒

中文名：DNA凝胶回收试剂盒

英文名：DNA gel Recovery Kit

货号：D598099

包装：10t、250t、500t

存储温度：室温

产品介绍：

本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中回收多至8μgDNA(70bp-10Kb)，回收率为60-85%。琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A溶液)中熔化，其中的保护剂能防止线状DNA在高温下降解，然后在DE-B溶液的作用下使DNA选择性结合到膜上。纯化的DNA纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于连接、体外转录、PCR 扩增、测序、微注射等分子生物学实验

组分：

组分备注：
Buffer DE-A: 凝胶熔化剂，含DNA保护剂，防止DNA在高温下降解，室温密闭贮存；
Buffer DE-B: 结合液（促使大于70bp的DNA片段选择性结合到DNA制备膜上），室温密闭贮存；
Buffer W1: 洗涤液，室温密闭贮存；
Buffer W2 concentrate: 去盐液，使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（用100%乙醇或95%乙醇），混合均匀，室温密闭贮存；
Eluent: 洗脱液，室温密闭贮存。

注意事项：

1.Buffer DE-A(含有 -基醇)Buffer DE-B 和 Buffer W1 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询；

2.在步骤 1 中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间(线型 DNA 长时间暴露在高温条件2.下易于水解)，从而提高回收率。勿将含 DNA 的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对 DNA造成的损伤。

3.在步骤 2中凝胶必须完全熔化，否则将严重影响 DNA 回收率；

4.将 Eluent 或去离子水加热至65°C，有利于提高洗脱效率；

5.DNA 分子呈酸性，建议在 2.5mM Tris-HCl，pH 7.0-8.5洗脱液中保存。

实验准备：
1.第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
2.准备无核酸和核酸酸污染的Tip头、离心管
3.准备75°C水浴。
4.使用前，检查Buffer DE-B是否出现沉淀，若出现沉淀，应于70°C温浴加热熔化并冷却至室温后再使用。

操作步骤：
1.在紫外灯下切下含有目的 DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量(提前记录 1.5 ml 离心管重量)，该重量作为一个凝胶体积(如 100 mg=100 μl 体积)。
2.加入3个凝胶体积的 Buffer DE-A，混合均后于75C 加热(低熔点琼脂糖凝胶于 40 加热),间断混合(每2-3 min)，直至凝胶块完全熔化(约6-8 min)Buffer DE-A 为红色溶液。在熔化凝胶的过程中，可以帮助观察凝胶是否完全熔化。
3.加0.5个 Buffer DE-A 体积的 Buffer DE-B，混合均。当分离的DNA 片段小于 400bp 时，需再加入1个凝胶体积的异丙醇。
*加 Buffer DE-B 后混合物颜色变为黄色，充分混匀以保证形成均一的黄色溶液。
步骤 4-6 可以选择负压法或离心法。
A.负压法
4A.正确连接负压装置，将 DNA 制备管插到负乐装置的插口上。吸取步 3 中的混合液，转移到制备管中，开启并调节负压至-25-30 英寸汞柱，缓慢吸走管中溶液。
5A.加500 l Buffer W1，吸尽管中溶液。
6A.加700 ul Buffer W2，吸尽管中溶液。以同样的方法再用 700 l Buffer W2洗涤一次，确认在 Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醉。
·两次使用 Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对后续实验的影响。
7A.将制备管置于2ml 离心管 (试剂盒提供)中，12,000xg 离心1min。

B，离心法
4B.吸取步骤3 中的混合液，转移到 DNA 制备管(置于 m 离心管(试剂内提供))中，12000Xg 离心1min。弃滤液。
5B.将制备管置回2 ml离心管，加500 l Buffer W1，12,000Xg 离心30 s，弃滤液。
6B.将制备管置回2 ml 离心管，加 700 l Buffer W2，12,000Xg 离心30s，弃滤液。以同样的方法再用 700 ul Buffer W2 洗涤一次 12,000xg 离心1min。，确认在 Buffer W2 concentrate 中已按过剂瓶上的指定体积加入无水乙醉两次使用 Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对后续实验的影响。
7B，将制备管置回2ml 离心管中，12,000Xg 离心1min。
8.将制备管置于洁净的 1.5 m 离心管中，在制备膜中央加 25-30 Euent 或去离子水，室温静置1min。12,000xg 离心1min 洗脱DNA。

将 Eluent 或去离子水加热至 65C将提高洗脱效率

应用范围：

核酸提取及纯化

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