魏氏试剂 羟丁酸脱氢酶—9028-38-0

羟丁酸脱氢酶—9028-38-0

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中文：羟丁酸脱氢酶

英文：β-HBDH

CAS：9028-38-0

分子式：C5H6ClN3

纯度：≥90%

中文同义词：β-羟丁酸脱氢酶; Beta-羟丁酸脱氢酶; D-3-羟丁酸脱氢酶;

英文同义词：β-HBDH, EC1.1.1.30; (R)-3-Hydroxybutanoate: NAD+ oxidoreductase;

技术指标

外观: 白色无定型冻干粉末;蛋白纯度: ≥90%; 比活性:≥300 U/mg 酶粉;苹果酸脱氢酶: ≤0.002%; 乳酸脱氢酶:≤0.002%; NADH 氧化酶: ≤0.002%

酶学性质

来源：微生物;分类：EC 1.1.1.30; 分子量：27 kDa(SDS-PAGE); 等电点：6.1;Km值：1.46×10-2 M；(D-3-Hydroxybutyrate)，9.5×10-5 M(NAD+); 抑制剂：Hg2+，Ag+，SDS

最适pH：8.5;最适温度：60℃; 用途:用于 β- 羟丁酸试剂的研发和大量配制。

酶活定义:单位酶活定义为在下述反应条件下，每分钟生成 1μmol NADH 所需的酶量。

试剂准备

试剂I：100 mM pH 8.5 Tris-HCl 缓冲液。

试剂II：158 mM 3- 羟丁酸钠溶液（用试剂I溶解）。

试剂III：27.9 mM NAD+（用试剂I溶解）。

试剂IV：100 mM Tris-HCl，pH 8.5，含0.1%BSA。

待测样品：用试剂 IV 将酶液稀释至 0.1-0.5U/mL。

操作步骤

1.在3 mL比色皿中加入 2.3 mL 试剂I，0.5mL 试剂II，0.2 mL试剂III，37℃ 预热 5 min。

2.加入100μL待测样品，混匀。

3.在340nm处37℃反应，记录1 min内的吸光度变化（ΔAs）

*用酶稀释液替代酶液，其它步骤相同，所得溶液吸光度为空白吸光度（ΔAb）ΔA=ΔAs-ΔAb