魏氏试剂 3α-羟基类固醇脱氢酶—9028-56-2

3α-羟基类固醇脱氢酶—9028-56-2

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中文：3α-羟基类固醇脱氢酶

英文：3α-HSD

CAS：9028-56-2

分子式：E.C.1.1.1.50

纯度：≥90%

中文同义词：3α类固醇脱氢酶,3α羟基类固醇脱氢酶,3ALPHA-羟基类固醇脱氢酶,3a-羟基类固醇脱氢酶,3a-羟类固醇脱氢酶

英文同义词：3α-HSD,3α-Hydroxysteroid Dehydrogenase,Dehydrogenase, 3a-hydroxy steroid,3alpha-Hydroxy steroid dehydrogenase

技术指标

外观:白色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥25 U/mg酶粉;葡萄糖6磷酸脱氢酶:≤0.01%;乳酸脱氢酶:≤0.005%;谷氨酸脱氢酶:≤0.001%;苹果酸脱氢酶:≤0.01%;己糖激酶:≤0.01%

酶学性质

来源:微生物;分类:EC 1.1.1.50;分子量:30 kDa(SDS-PAGE);等电点:5.2;Km值:3.6×10-5 M(雄酮)，4.7×10-5 M(NAD+);抑制剂:Cu2+，Ag+，Hg2+，Zn2+，Fe3+;最适pH:8.5-9.5;

最适温度:55℃;pH稳定性:6.0-9.0(25℃,16 h);热稳定性:37℃以下稳定(pH 9.0,30 min);稳定性:-25～-15℃静置保存12个月保持90%以上活性;保护剂:BSA.

用途:用于总胆汁酸（TBA）试剂的研发和大量制备。

酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化生成1μmol NADH所需的酶量。

试剂准备

试剂I：0.1 M焦磷酸钠（用HCl调pH至8.9）。

试剂II：将319 mg NAD+溶解至25 mL双蒸水中，用固体NaHCO3调节pH至7.0-7.5，用双蒸水定容至30 mL。

试剂III：将30mg溶解至100mL甲醇中。

酶稀释液：10mM Tris-HCl，pH 9.0。

操作步骤

1.向3 mL比色皿中依次加入2.6 mL试剂I，0.2 mL试剂II，0.1 mL试剂III，混匀。

2.将反应混合物在25℃预热5 min。

3.向反应混合物中加入0.1 mL酶液，混匀，

25℃反应，并用分光光度计在340 nm下，记录1 min内的吸光度变化（ΔAs）

*用酶稀释液替代酶液，其它步骤相同，所得溶液吸光度为空白吸光度（ΔAb）ΔA=ΔAs-ΔAb