魏氏试剂 甘油激酶—9030-66-4

甘油激酶—9030-66-4

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中文：甘油激酶

英文：GK

CAS：9030-66-4

分子式：C3H8O3

纯度：≥90%

货期：24h

货号：HH1205-01

规格：5ku

中文同义词：甘油激酶; 甘油激酶GK;

英文同义词：GK; GLK; HK4; HHF3;

技术指标

外观：白色或淡黄色无定型冻干粉末蛋白纯度：≥90%; 比活性：≥15 U/mg 酶粉; 过氧化氢酶：≤0.001%; 尿酸酶：≤0.01%; 己糖激酶：≤0.01%; ATP 酶：≤0.005%

酶学性质

来源：微生物; 分类：EC 2.7.1.30; 分子量：55 kDa(SDS-PAGE); 等电点：5.0; Km值：4.4×10-5 M(Glycerol), 3.7×10-5

M(ATP); 抑制剂：Ag+，Hg2+; 最适：pH 7.5

用途：用于甘油三脂试剂的研发和大量配制。

酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下，每分钟消耗1μmol甘油所需的酶量。

试剂准备

试剂I：0.3 M 甘油（称取0.552 g 甘油用纯水定容到20 mL）。

试剂II：纯水配制1 kU/mL POD。

试剂III：50 mM TOOS（1.477 g TOOS 溶于 100 mL UP水）。

试剂IV：50 mM 4-AA（1.016 g 4-AA溶于 100 mL UP 水）。

试剂V：20 U/mL甘油-3-磷酸氧化酶。

试剂VI：200 mM HEPES，含 20 mM MgCl2 和 40 mM ATP（0.953 g HEPES，0.076 gMgCl2，0.44 g ATP，用10 mL 水溶解，用 NaOH 调节 pH 至 7.9，定容到 20 mL）。

按如下配制反应混合物：

试剂VI：10 mL; 试剂I: 1.67 mL; 试剂II: 400μL; 试剂III: 3 mL; 试剂IV: 3 mL; 试剂V: 40 mL; 双蒸水定容至 100 mL

酶稀释液：20 mM, pH 7.5 磷酸钾缓冲液。样品：用酶稀释液将酶稀释至 0.2-0.4 U/mL。

操作步骤

1. 在 1 mL 比色皿中加入 1.0 mL 反应混合物。

2. 37℃温浴2 min。

3. 加入0.02 mL待测样品，混匀。

4. 用分光光度计在555 nm测定样品1 min内的吸光度变化 ΔAs。

*用 酶稀释液替代酶液，其它步骤相同，所得溶液吸光度为空白吸光度 ΔAb。ΔA=ΔAs-ΔAb