参数规格:
产品名称:即肠道病毒型PCR检测试剂盒
型号 : EY00P419
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
运输:低温
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
实验操作过程:
一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备
用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释, 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下:
1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
轻微振荡混匀,简短快速离心。
2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s,涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。
5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4。
表 2. CHO control DNA 的稀释
稀释管 | 稀释体积 | 浓度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加样回收质控 ERC 的制备
根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO control DNA 的加样浓度 (以制备加 45pg CHO control DNA 的样本 ERC 为例),操作如下:
1,取待测样本 100u,加至 1.5ml 干净的离心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混匀,标记为样本 ERC。
注:样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。
三、阴性质控 NEG 的制备
根据实验设置阴性质控,操作如下:
1,取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注:阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。
四、 qPCR 反应液的制备和加样
1,根据所要检测的标准曲线及待测样本数量,计算所需反应孔数,一般做 3 个重复孔/样。
反应孔数= (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注:待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。 2,根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul (含有 2 孔的损失量)
10×CHO qPCR mix= (反应孔数+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反应孔数+2) ×2ul
3,各试剂置于冰上融化,振荡混匀,按表 3 所示进行加样:
表 3.各反应孔加样示例
标准曲线 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待测样本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待测样本 |
ERC 样本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 样本 |
注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
脐带间充质干细胞总RNAHUMSC NAL-正缬氨酸叔丁酯盐酸盐质量规格:0.99L-Valine t-butyl ester
MCF-7B细胞,癌细胞 兔的肝细胞,VX2细胞 PANC-1, 胰腺癌细胞4-硝基-L-苯丙氨酸质量规格:0.984-Nitro-L-phenylalanine monohydrate
MuM-2B(眼脉络色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2N-乙酰-DL-丙氨酸质量规格:0.98N-Acetyl-DL-Alanine
HUVEC pooled Pellet 脐静脉内皮细胞混合团块 > 1 mio.cells 上皮细胞培养基-2EpiCM-2N-乙酰基咪唑(>98.0%(GC)(T))质量规格:>98.0%(GC)(T)N-Acetylimidazole
CL-0398NCI-H2452(间皮瘤细胞)5×106cells/瓶×21-(七氟丁酰)咪唑(>97.0%(GC)(T))质量规格:>97.0%(GC)(T)1-(Heptafluorobutyryl)imidazole
即肠道病毒型PCR检测试剂盒骨抑制素,人Osteostatin (human)质量规格:>95%,BR RatVitaminB6,VB6ELISA试剂盒大鼠维生素B6(VB6)ELISA试剂盒规格:96T/48T 胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒 ,英文名: IGFBP-1 ELISA Kit
骨抑制素(1-5)酰胺,人,牛,狗,大鼠,小鼠,兔,马Osteostatin (1-5) amide(human, bovine, dog, horse,mouse, rabbit, rat)质量规格:>95%,BR 小鼠溶酶体酸性1酸酶2(ACP2)ELISA试剂盒 ,英文名: ACP2 ELISA Kit MouseAi-SmoothMuscleAibody,ASMAELISA试剂盒小鼠抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
骨抑制素酰胺,人Osteostatin amide (human)质量规格:>95%,BR 猪生长激素(GH)ELISA检测试剂盒Porcinegrowthhormone,GHELISAKit 96T/48T ELISAKitPK小鼠同酸激酶规格:48T/96T
p60 v-结构域(137-157)p60 v-src (137-157)质量规格:>95%,BR 大鼠转化生长因子β刺激蛋白22(TSC22)试剂盒 Rat ansforming growth factor-beta-stimulated Protein clone-22,TSC22 ELISA Kit guineapigImmunoglobulinA,IgAELISAKit豚鼠球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
溶剂绿 7(>85.0%(E))Pyranin质量规格:>85.0%(E) Humanai-cytomegalovirusIgMaibody,ai-CMVIgMELISA试剂盒人胎儿血红蛋白(HBF)ELISA试剂盒规格:96T/48T 人型肝炎IgM(HCV-IgM)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
磺酰荧光素(>75.0%(HPLC)(T))Sulfonfluorescein质量规格:>75.0%(HPLC)(T) 植物基因组DNA化试剂盒(低多糖/酚)50 豚鼠白介素5(IL-5)试剂盒 Guinea pig ierleukin 5,IL-5 ELISA Kit
N-琥珀基-7-羟基-3-羧酸酯(>95.0%(HPLC)(T))N-Succinimidyl 7-Hydroxycoumarin-3-carboxylate质量规格:>95.0%(HPLC)(T) Humanα1-glycoprotein,α1-AGPELISAKit人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA试剂盒规格:96T/48T 髓1脂碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒 ,英文名: MBP ELISA Kit
N-琥珀基-7-甲氧基-3-羧酸酯(>98.0%(HPLC)(N))N-Succinimidyl 7-Methoxycoumarin-3-carboxylate质量规格:>98.0%(HPLC)(N) 小鼠胶原交联(PYD)ELISA试剂盒 ,英文名: PYD ELISA Kit MouseVitaminB6,VB6ELISA试剂盒小鼠维生素B6(VB6)ELISA试剂盒规格:96T/48T