氮自由基(DPPH)清除能力测试试剂盒分光光度计法

氮自由基（DPPH）清除能力测试试剂盒

(A001-96T 分光光度计法)

一.测定原理

DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基，有一个单电子，在517nm下有强吸收，如果有其他物质提供一个电子使此单电子配对，其吸收会消失褪色，褪色程度与接受电子的量呈正比。即反应物清除氮自由基的能力与试剂在517nm的吸光值成反比。

二.试剂组成

试剂一：DPPH试剂1mL×1瓶

试剂二：100μg/mL 维生素C标准溶液 20mL×1瓶

三.储存条件及有效期

试剂盒-20℃可保存6个月。

四.试剂的配制

试剂一：37℃平衡20min以上，待试剂融化后，在试剂瓶中加入100ml 95%乙醇或无水乙醇，剧烈震荡使试剂充分溶解。

注意：溶解一定要充分，如有条件可采用超声波助溶。

试剂二应用液：根据是否需要制作阳性对照标准曲线有两种配制方法。

1. 如仅需要将维生素C作为质控品，可取100μL 试剂二，加入900μL样品稀释液，充分混匀；

2. 如需测定维生素C的IC50，可分别移取0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0mL 试剂二于空离心管中，再依次加入10.0，9.5，9.0，8.5，8，7.5，7.0，6.0，5.0ml样品稀释液，充分混匀。配制成0，5，10，15，20，25，30，40，50 μg/mL 维生素C样品。

五.操作步骤

充分混匀，室温避光静置30min使之充分反应。选用0.5mm比色皿3，517nm处测定吸光值。

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