PA317（小鼠成纤维细胞）

1.细胞起源：

细胞简称 PA317

细胞别称 pA317

细胞背景描述 PA317细胞源自TK-NIH/3T3细胞，通过pBR322中的包装结构DNA(pPAM3)和pBR322中的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因共同转染构建而成。通过感染或转染将逆转录病毒载体导入这些细胞，结果生成可以感染许多哺乳动物细胞的双嗜性载体颗粒。PA317细胞生成的病毒颗粒已成功地用于将基因导入人类，可能因为用于构建PA317细胞而转入的DNA丢失，能够包装逆转录病毒载体的PA317细胞百分比随传代而减少。在含0.03mM次黄嘌呤、0.001mM氨甲喋呤和0.02mM胸苷的培养基中短暂(大约5天)选择，可以选出保留了包装功能的细胞。选择后，PA317细胞应在HT培养基(0.03mM次黄嘌呤、0.02mM胸苷)中培养4天，以稀释残留的氨甲喋呤，此后PA317细胞不需选择可以稳定至少1个月。

供体年龄 胚胎

组织来源 胚胎

细胞形态 成纤维细胞样

细胞类型 转化细胞系

生长特性 贴壁细胞

生物安全等级 1

2.培养及保藏：

完全培养基 DMEM(PM150210)＋10% FBS(164210-50)＋1% P/S(PB180120)

培养环境 空气，95%；CO ₂，5%

37℃

冻存条件 55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

液氮

3.传代方法：

传代步骤

1、吸出原培养液；

2、加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃；

3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞；

4、放入培养箱消化，显微镜下看到细胞块中间的细胞明显变圆有间隙时可终止，全程不要拍打培养瓶；

5、加入3ml含血清的培养基终止消化，吹打细胞使之脱壁并在液体里反复吹打使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液；

6、收集细胞悬液离心，1200rpm/min 3分钟，离心完吸出上清丢弃；

7、加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可，按比例接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

传代比例（密度） 1:3-1:4

换液频次 2~3次/周

本产品仅供科研使用。不能用于人和动物治疗等其它临床诊断使用！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。