胆固醇酯酶(CE)

　　技术指标

　　外观：白色至浅棕色无定型冻干粉末；蛋白纯度：≥90%；比活性≥100U/mg酶粉；过氧化氢酶：≤0.001%；蛋白酶≤0.001%；尿酸酶：≤0.01%；ATP酶：≤0.005%；甘油激酶：≤0.01%；葡萄糖氧化酶：≤0.01%；

　　酶学性质

　　来源：微生物，胆固醇酯酶；分类：EC3.1.1.13；分子量：61kDa(SDS-PAGE)；等电点：5.15；Km值：5.8×10-5MCholesterollinoleate；抑制剂：Ag+；最适：pH5.0；最适温度：55；pH稳定性4.5-9.0(37℃℃,60min)；热稳定性：50℃以下稳定(pH7.5,30min)；稳定性：-20℃静置保存12个月保持90%以上活性；保护剂:胆酸钠以及BSA。

　　酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化生成1μmolH2O2所需的酶量。

　　试剂准备

　　试剂I：0.2M磷酸钾缓冲液，pH6.0。

　　试剂II：在2.0mL异丙醇中加入39mg胆固醇亚油酸酯，水浴轻微加热至完全溶解。加入约80mL72-74℃预热的1%GenapolX-80，72-74℃水浴并搅拌30min，溶液会先变澄清后变浑浊。用自来水冷却溶液至室温。加入0.6g胆酸钠，溶解后用1%GenapolX-80溶液定容至100mL。

　　试剂III：1kU/mLPOD。

　　试剂IV：50mMTOOS溶液。

　　试剂V：50mM4-AA溶液。

　　试剂VI：300U/mLCOX酶液。

　　酶稀释液：20mM磷酸钾缓冲液，pH6.0，含2mMMgCl2，0.5mMEDTA-Na2和0.2%BSA。

　　操作步骤

　　1.向3mL比色皿中加入2.75mL反应混合物。

　　2.加入0.1mL试剂VI，37℃温浴2min.

　　3.加入0.1mL待测酶液，混匀。

　　4.37℃反应，用分光光度计在555nm检测样品1min内的吸光度变化（ΔAs）