α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒

α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒说明书

                                 
                                                                分光光度法 50管/24样

注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒测定意义：

淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

测定原理：

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。β-淀粉酶不耐热，在70℃钝化15min，从而测定α-淀粉酶活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：25mL×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需90℃加热溶解后再用；

试剂二：20mL×1瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需70℃加热溶解后再用。

α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒粗酶液提取：

组织：称取0.1~0.2g样本（建议称取约0.1g样本），加1 mL蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管中，在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；3000g，25℃离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，即为淀粉酶原液。

血清（浆）：直接检测。

操作步骤和加样表（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）： 

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长到540 nm，蒸馏水调零。

2、 试剂一或试剂二40℃预热10min

3、测定步骤

70℃水浴15min左右，冷却

在40℃恒温水浴中准确保温5min

混匀，95℃水浴5min，冷却， 540nm处读取对照管和测定管吸光度，计算ΔA=A测定管-A对照管。

α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）试剂盒活性计算：

1、标准条件下测定回归曲线为y=3.7215x -0.1778； x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

2、α淀粉酶活性

（1）按照样本质量计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

α淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=1.075×(ΔA＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

α淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷（V样×Cpr）÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778) ÷Cpr

（3）血清（浆）样本中α淀粉酶活性计算

单位定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

α淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778) 

V反总：反应体系总体积，0.5mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V样总：提取液总体积，10 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。