"DiFi:人结直肠癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞生长:贴壁
有一些细胞是数量多一点比较HAO生长,生长状态也比较HAO。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较HAO,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较HAO。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候,细胞形态基本上就会差了,老化的会比较多,对后期实验结果是不HAO的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞,如果细胞形态不HAO,(或者细胞形态不清晰,表面似有异物等)可以在传代的时候进行如下操作:首先,倒掉旧的培养基,加入3ml新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。(巨噬细胞建议只吹打,不消化)其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次,20分钟,30分钟观察一次。选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁的情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中的培养基,加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想,可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意,结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得HAO的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
SUNE1细胞类似产品::GM06141B细胞、NCIH1930细胞、NCIH446细胞
MLO-Y4细胞类似产品::HELF细胞、Hs 832(C).T细胞、Jiyoye (P-2003)细胞
SHI-1细胞类似产品::T24(ECV304)细胞、C32r细胞、A 172细胞
D-324 Med细胞类似产品::NCI-SNU-182细胞、HCT-116细胞、H2066细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞背景资料:结直肠癌;女性
DiFi:人结直肠癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞形态:上皮细胞样
H1417细胞类似产品::Jiyoye细胞、GM03671C细胞、GM2131细胞
SR786细胞类似产品::NOR-10细胞、NCIH1944细胞、639-V细胞
143TK-细胞类似产品::BE(2)C细胞、SK Hep1细胞、WRL-68细胞
培养细胞的冻存及复苏:细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中,储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】1)选对数增生期细胞(证明无支原体污染),在冻存前1d换液;2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达5×10/ml左右密度,离心,去上清;3)加入配制HAO的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO)或甘油,可使冰点降低,使细胞内水分在冻结前透出细胞外;4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m悬液;5)旋HAO冻存管并仔细检查,一定要盖紧,做HAO标记;6)冻存:在殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min时间内,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。【复苏细胞】1)从罐中取出冻存管;2)迅速放入36℃~37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成;3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10ml培养液;4)低速离心(500~1000r/min) 5min,去上清后再用培养液洗一次;5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分,密度应达到10/ml,在融后稀释20倍时,仍能保持5×10/ml数量。
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁
细胞传代后放入培养箱没有摇匀,或者放入时摇匀,但在细胞贴壁前,又移动了培养瓶,频繁开关培养箱引起的振动或者培养瓶中培养液过少,培养箱搁板表面不平整,这些因素会导致细胞生长不均匀。研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。运输过程对细胞有严重影响。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C 太久。一些悬浮细胞抱团生长是正常现象,大部分悬浮细胞在细胞密度很GAO的情况下,很可能会出现部分细胞抱团生长的现象,聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物,殃及周围的悬浮细胞,因此在培养悬浮细胞时需控制HAO细胞密度。如果出现了细胞团,可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团,也可以尝试一下方法:将细胞悬液收集到15ml离心管中,静置20min左右,小心取上层细胞上清培养(该方法只能去除部分较大的细胞团)。部分细胞本身存在一定的空泡(如HepG2,Ishikawa及一些耐药株等),这个是正常现象。如果只有少数细胞有内出现极少空泡,则很可能是细胞状态不佳,可以通过调整血清浓度,控制消化,控制传代比例及时间等方法来调整细胞状态;如果大部分细胞出现空泡,且单个细胞内空泡数目偏多,则可能细胞代次较GAO,细胞老化所致,需更换代次较早的细胞。
SNU-354细胞类似产品::SK RC 20细胞、Ketr-3细胞、NCTC-1469细胞
WM-266-4细胞类似产品::CCD-966SK细胞、T-HSC细胞、MCF-7/ADR-RES细胞
JCA1细胞类似产品::NCI-Hut 125细胞、Sp2/O细胞、H-64细胞
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GM12878细胞类似产品::KM-12细胞、COR-L26细胞、HDLM2细胞
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CAL-78细胞类似产品::NCI-H1435细胞、COLO 680N细胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5细胞
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HL60细胞类似产品::MT-3 [Human leukocytes]细胞、Farage细胞、MDA MB 436细胞
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HECV细胞类似产品::CCD 19Lu细胞、NCTC 3960细胞、PANC-28细胞
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Hs-27细胞类似产品::SKNBE2细胞、NTERA2-D1细胞、SNU5细胞
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GM2132细胞类似产品::CCD 841 CoTr细胞、H2347细胞、WEHI-3细胞
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EL 4细胞类似产品::L5178Y细胞、Hs 294T细胞、HuH-28细胞
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MDA-MB-134VI细胞类似产品::OCI-AML3细胞、LM-TK-细胞、NCI-H2087细胞
NCI-H211细胞类似产品::H22细胞、JG细胞、P3 (Jiyoye)细胞
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MD Anderson-Metastatic Breast-330细胞类似产品::RINm-5F细胞、3T3-Swiss albino细胞、EBC1细胞
Gerner 7666细胞类似产品::Hs 821.T细胞、RT 112细胞、HEK 293A细胞
DoTc2-4510细胞类似产品::MS-751细胞、RPMI no. 8226细胞、SG231细胞
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MSTO-211 H细胞类似产品::H-1666细胞、L5178Y-R细胞、Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2细胞
DiFi:人结直肠癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
RS4;11细胞类似产品::KYSE 150 KYSE150 Kyse150 KY150
细胞、Colo741细胞、D10G41细胞
FCCH1024细胞类似产品::751-NA细胞、KBM-7细胞、Emory University-3细胞
HEK293-EBNA1细胞类似产品::16HBE细胞、M21细胞、IPECJ2细胞
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HCT 116细胞类似产品::H1694细胞、MOLT-16细胞、Metastatic Variant-522细胞
U138细胞类似产品::EJ-1细胞、SW-1353细胞、EC-9706细胞
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