人结直肠癌细胞;DiFi

产品信息：

这是一份关于人结直肠癌细胞（DiFi）的详细说明、细胞特性及标准培养操作指南。

DiFi 细胞是一种独特的人结直肠癌细胞系，它不仅表达结直肠癌的标志物，还具有表皮生长因子受体（EGFR）的高表达特征，常用于结直肠癌的靶向治疗及耐药机制研究。

细胞基本信息

种属来源：人（Homo sapiens）

组织来源：结直肠腺癌（Colorectal Adenocarcinoma）

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

特殊标记：EGFR 高表达（该细胞系源于一名对西妥昔单抗产生耐药性的患者，EGFR 表达水平极高）

基因特征：通常携带 BRAF V600E 突变（这使得它对 EGFR 抑制剂不敏感，常作为耐药模型使用）。

培养基：DMEM (高糖) + 10% FBS + 1% 双抗

细胞特性与应用

特征维度  详细描述

背景简介  DiFi 细胞系是从一名患有广泛转移性结直肠癌患者的腹水中分离建立的。

EGFR 表达  该细胞是研究 EGFR 信号通路的极佳模型，其 EGFR 表达水平远高于一般的结直肠癌细胞系（如 DiFi > A431）。

BRAF 突变  携带 BRAF V600E 突变，这意味着它对西妥昔单抗（Cetuximab）等抗 EGFR 单抗治疗通常不敏感，常用于模拟临床耐药情况。

主要应用  1. 结直肠癌靶向治疗研究（特别是 EGFR 抑制剂）。

耐药机制探索。

肿瘤细胞信号转导研究。

推荐培养体系

基础培养基：DMEM（高糖，High Glucose）

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)

双抗添加：1% 青霉素-链霉素 (P/S)

培养环境：

温度：37℃

气体环境：95% 空气 + 5% CO

湿度：维持培养箱内湿度 >90%。

详细培养操作指南

1. 细胞复苏 (Thawing)

预热：将水浴锅调至 37℃，预热完全培养基。

解冻：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，轻轻摇晃，使其在 1-2 分钟内 快速融化。

转移：用 75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒，转入超净台。

稀释：将细胞悬液缓慢加入含有 4-6 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO 毒性）。

离心：1000 rpm (约 250g) 离心 3-5 分钟。

接种：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，接种至 T25 培养瓶中，放入培养箱静置培养。

细胞传代 (Passage)

DiFi 为贴壁细胞。

观察：当细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代。

清洗：弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的 PBS 缓冲液润洗细胞 1 次。

消化：加入适量消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA），以覆盖瓶底为宜。

镜下观察：置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟，在显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落时，迅速拿回操作台。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。

离心：1000 rpm 离心 5 分钟。

重悬与分瓶：弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按 1:2 至 1:3 的比例进行分瓶传代。

细胞冻存 (Freezing)

状态选择：选择对数生长期、活力好、形态佳的细胞。

计数：消化收集细胞，离心后重悬，进行细胞计数。

冻存液：推荐使用 90% 完全培养基 + 10% DMSO，或专用无血清冻存液。

密度：调整细胞密度至  cells/mL。

程序降温：分装入冻存管，使用程序降温盒（-80℃ 过夜），然后转入液氮罐长期保存。

关键注意事项

BRAF 突变与耐药性：DiFi 细胞携带 BRAF V600E 突变，这决定了它对西妥昔单抗等药物具有天然耐药性。在进行药物实验时，需注意这一背景特征。

EGFR 高表达：该细胞是研究 EGFR 通路的绝佳工具，但同时也意味着其生长对血清和生长因子较为敏感。

运输脱落：DiFi 细胞在运输过程中，可能会因震荡导致少量细胞从瓶壁脱落。收到细胞后，若发现瓶底有漂浮细胞团，属正常现象。请将瓶内液体转移至离心管，离心收集细胞，弃上清，用 PBS 清洗一次，再用完全培养基重悬后接种回培养瓶中。

支原体检测：建议定期检测支原体，确保细胞无污染。

STR 鉴定：为确保细胞系的身份纯正，防止交叉污染，建议定期进行 STR 鉴定。

公司正在出售的产品：

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Anti-NFKB p52/NF-κB2 p100/FITC 荧光素标记细胞核因子/k基因结合核因子 p52/p100抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml	人结直肠癌细胞;DiFiAmphetamine(2A3F) 英文名称： 单克隆/抗体 0.1ml
c-Myc tag 英文名称： c-Myc tag标签抗体 0.1ml	CD244 Kit Human 人 2B4 / CD244 ELISA配对抗体 ELISA

细胞类型与特性

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。