microRNA 提取试剂盒

microRNA 提取试剂盒

一、产品简介。

microRNA 提取试剂盒是一款专门用于提取 miRNA 等小 RNA（5 s RNA）的系统，可以快速的从细胞和组织中提取高纯度的 microRNA，同时去除 28 s 和 18 s RNA，用于反转录、测序等生物学实验。

二、运输与存储条件。

本产品常温运输与保存，有效期 12 个月。

三、特点与优势。

1. 本试剂盒提取的 microRNA 纯度高，几乎不含 28 s 和 18 s RNA。

2. 本试剂盒无需酚/ 氯仿抽提，及氯化锂或异丙醇沉淀，显著提高实验操作的安全性。

四、自备试剂与耗材。

无水乙醇，70%乙醇，无 RNA 酶的 EP 管（1.5 mL）和枪尖。

五、使用说明。

1. 试剂配制：

a) Wash Buffer C（去蛋白液）配制。在 Wash Buffer C 试剂中加入 21 mL 无水乙醇，混匀。

b) Wash Buffer D（漂洗液）配制。在 Wash Buffer D 试剂中加入 24 mL 无水乙醇，混匀。

2. 细胞和组织裂解。

1) 细胞裂解。

a) 贴壁细胞裂解。胰酶消化法收集细胞并计数，按照细胞数量添加一定体积的裂解液。或根据细胞培养皿大小，直接加入裂解液，利用移液器吹打，混匀，转移到 EP 管中，室温裂解 2 min。

b) 悬浮细胞裂解。离心收集悬浮细胞并计数，按照细胞数目添加一定体积的裂解液，混匀，室温裂解 3 min。

2) 动物组织裂解。将组织块加入裂解液中，利用手持式匀浆器破碎组织，室温裂解 3 min，再12,000×g，4 ℃离心 3 min，弃沉淀，上清转移至新的 EP 管，即为组织裂解液。

3. 细胞或组织裂解液中加入等体积的 70%乙醇，混匀，转入 RNA 纯化柱。

4. 12,000×g，4 ℃离心 30 sec，弃纯化柱（柱上吸附了 28 s 和 18 s RNA，若需要这两种类型的 RNA，则洗涤纯化柱，用 Elution Buffer R 洗脱即可），收集滤液（含有 microRNA）。

5. 向滤液中加入 450 μL 无水乙醇，混匀。

6. 取 600 μL 混合液加入新的 RNA 纯化柱中，12,000×g，4 ℃离心 30 sec，弃滤液。

7. 将剩余的混合液加入对应的 RNA 纯化柱中，12,000×g，4 ℃离心 30 sec，弃滤液。

8. 向 RNA 纯化柱中加入 500 μL Wash Buffer C（去蛋白液），12,000×g，4 ℃离心 30 sec，弃滤液。

9. 向 RNA 纯化柱中加入 500 μL Wash Buffer D（漂洗液），12,000×g，4 ℃离心 2 min，弃滤液。

10. 将 RNA 纯化柱插入新的 RNase-free EP 管中，向柱中央滴加 100 μL Elution Buffer R（洗脱液）或 RNase-free ddH2O，室温静置 2 min。

11. 12,000×g，4 ℃离心 2 min，得到 microRNA 溶液。

12. 立即用于反转录实验，或保存于-80 ℃冰箱。

六、注意事项。

1. 本产品提取的 RNA 中，只含有小 RNA (5 s RNA)，几乎不含 28 s 和 18 s 的 RNA。

2. 请穿好实验服、佩戴乳胶手套和安全眼镜，避免试剂飞溅导致的皮肤、眼睛等部位的化学灼伤。