武汉艾美捷科技有限公司

研究目的：

目的是定量测试样本中人类因子P的含量。该产品仅供经过培训的实验室人员使用。不得使用结果用于临床诊断或患者管理。仅供研究使用。

艾美捷补体P因子定量检测试剂盒（Complement Factor P Quantitative assay）（#COMPL FPQ RUO）的测定原理：

补体因子P定量分析是一种夹心ELISA，用于定量分析例如血清或血浆样本中的人体因子P。该分析基于96孔板中固定的抗体，捕获在板中孵化的测试样本中的因子P。用HRP标记的二级抗体检测结合的因子P。随后HRP催化底物的切割，引起颜色变化，与测试样本中因子P的浓度相关。

需要但未提供的物料或设备：

带有450纳米和620纳米滤光片的酶标仪

轨道摇床（除非包含在酶标仪的功能中）

带一次性吸头的精密移液管

96孔板或条的洗涤器

吸水纸

试剂和样品稀释用的容器

计时器

稳定性和储存：

试剂应储存在2-8°C。在2-8°C下储存时，稀释后的洗涤液有效期至套件的有效期。

标本收集和准备：

应使用无菌静脉穿刺技术收集全血样本，并使用标准程序获得血清或EDTA血浆。建议每个样本至少抽取5毫升全血。离心血样并将无细胞血清或血浆转移到干净的试管中。

离心后的血清或EDTA血浆可保存在4°C。较长时间储存时，血清和血浆样本应冷冻在-20°C或更低温度。建议在分析前不要将测试样本冻融超过两次。

每个实验室应确定测试样本储存条件的可接受性，因为这可能因预分析因素而异。

结果评估：

对于每个数据点，从450纳米波长减去620纳米参考波长，并计算所有重复样本的平均吸光度值。

通过绘制六种校准器的吸光度与浓度（0 ng/ml、12.5 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml和200 ng/ml）构建校准曲线。

在这个应用说明的例子中（图2），使用了4参数曲线拟合，但用户可以选择不同的曲线拟合。根据校准曲线读取未知样本的浓度。

注意：要计算样本中因子P的浓度，必须根据上述协议进行稀释补偿，即200倍。如果选择了不同的样本稀释，应相应地进行补偿。

补体P因子定量检测试剂盒校准曲线示例：

请注意：上图显示了一个标准曲线的示例，不应用于实际样品解释。

补体P因子定量检测试剂盒文献参考：

(1) Blatt, A. Z.; Pathan, S.; Ferreira, V. P. Properdin: A Tightly Regulated Critical Inflammatory Modulator.Immunol Rev 2016, 274 (1), 172–190.

(2) Fearon, D. T.; Austen, K. F. Properdin: Binding to C3b and Stabilization of the C3b-Dependent C3 Convertase. J Exp Med 1975, 142 (4), 856–863.

(3) Chen, J. Y.; Cortes, C.; Ferreira, V. P. Properdin: A Multifaceted Molecule Involved in Inflammation and Diseases. Mol. Immunol. 2018, 102, 58–72.

(4) Cortes, C.; Ohtola, J. A.; Saggu, G.; Ferreira, V. P. Local Release of Properdin in the Cellular

Microenvironment: Role in Pattern Recognition and Amplification of the Alternative Pathway of Complement.Front Immunol 2013, 3.

(5) Pangburn, M. K. Analysis of the Natural Polymeric Forms of Human Properdin and Their Functions in Complement Activation. The Journal of Immunology 1989, 142 (1), 202–207.

(6) Smith, C. A.; Pangburn, M. K.; Vogel, C. W.; Müller-Eberhard, H. J. Molecular Architecture of Human Properdin, a Positive Regulator of the Alternative Pathway of Complement. J. Biol. Chem. 1984, 259 (7),4582–4588.

(7) Fijen, C. A. P.; van den Bogaard, R.; Schipper, M. Properdin Defciency: Molecular Basis and Disease Association. Molecular Immunology 1999, 36, 863–867.

(8) Michels, M. A. H. M.; Volokhina, E. B.; van de Kar, N. C. A. J.; van den Heuvel, L. P. W. J. The Role of Properdin in Complement-Mediated Renal Diseases: A New Player in Complement-Inhibiting Therapy Pediatr Nephrol 2019, 34 (8), 1349–1367.

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