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肿瘤坏死因子α(TNFα)ELISA是一种夹心酶免疫分析法，用于体外定量测量大鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液和细胞培养上清中的TNFα。antibodies-online提供试剂盒组分的验证数据（WB），因此这是一种由高质量试剂组成的可靠ELISA试剂盒产品。

 

艾美捷肿瘤坏死因子α(TNFα)ELISA试剂盒：

货号：ABIN6574141

目标：肿瘤坏死因子α（TNF alpha）

反应性：大鼠

检测方法：比色法

方法类型：夹心ELISA

检测范围：15.6 pg/mL - 1000 pg/mL

最低检测限：15.6 pg/mL

应用：ELISA

样本类型：细胞培养上清、细胞裂解液、血浆、血清、组织匀浆

分析方法：定量

特异性：该测定法对检测肿瘤坏死因子α（TNFα）具有高灵敏度和极佳的特异性。

交叉反应性（详情）：未观察到肿瘤坏死因子α（TNFα）与其类似物之间有显著的交叉反应或干扰。

灵敏度：5.9 pg/mL

样本体积：100 μL

测定时间：3小时

板：预涂覆

使用注意事项：与本试剂盒配套使用的停止液是酸性溶液。使用此材料时，请佩戴眼睛、手、面部和衣物保护。

储存：4 °C/-20 °C

对于未开封的试剂盒：所有试剂应根据瓶身上的标签存放。标准品、检测试剂A、检测试剂B和96孔条板应在收到后存放在-20°C，而其他试剂应存放在4°C。

对于已开封的试剂盒：剩余的试剂必须按照上述储存条件存放。此外，请将未使用的孔放回含有干燥剂的铝箔袋中，并用拉链密封铝箔袋。

仅限研究使用

 

肿瘤坏死因子α(TNFα)ELISA试剂盒组分：

预涂覆、即用型96孔条板，平底

96孔板封盖

参考标准

标准品稀释液

检测试剂A

检测试剂B

测定稀释液A

测定稀释液B

试剂稀释液（如果检测试剂为冻干）

TMB底物

停止液

洗涤缓冲液（30倍浓缩）

说明书

 

关于标准物质的信息：

标准品可能是重组蛋白或天然蛋白，这将取决于特定的试剂盒。此外，表达系统可能是大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞。标准品中含有0.05%的proclin 300作为防腐剂。

关于试剂的信息：

试剂盒中使用的停止液是浓度为1 mol/L的硫酸。洗涤液是TBS。标准品稀释液中含有0.02%的叠氮钠，测定稀释液A和测定稀释液B中含有0.01%的叠氮钠。有些试剂盒中可能含有BSA。

关于抗体的信息：

不同试剂盒中提供的抗体及其宿主会有所不同。

 

方案：

准备所有试剂、样本和标准品，

向每个孔中加入100μL的标准品或样本。在37°C下孵化1小时，

抽吸并加入100μL准备好的检测试剂A。在37°C下孵化1小时，

抽吸并洗涤3次，

加入100μL准备好的检测试剂B。在37°C下孵化30分钟，

抽吸并洗涤5次，

加入90μL底物溶液。在37°C下孵化10-20分钟，

加入50μL停止液。立即在450nm处读取。

 

试剂准备：

使用前将所有试剂盒组分和样本平衡至室温（18-25°C）。如果试剂盒不会一次性用完，请只取出当前实验所需的条带和试剂，并将剩余的条带和试剂留在所需的条件下。

标准品 - 用0.5 mL的标准品稀释液重组标准品，室温下放置10分钟，轻轻摇晃（不要产生泡沫）。库存溶液中标准品的浓度为1,000pg/mL。准备7个含有0.25 mL标准品稀释液的试管，并制作双倍稀释系列。在下一个转移前彻底混合每个试管。设置7个稀释标准点，如1,000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL、125pg/mL、62.5pg/mL、31.2pg/mL、15.6pg/mL，最后一个微量离心管与标准品稀释液为空白，即0pg/mL。

检测试剂A和检测试剂B - 如果为冻干品，用150μL的试剂稀释液重组检测试剂A，室温下放置10分钟，轻轻摇晃（不要产生泡沫）。使用前请短暂离心或旋转库存检测A和检测B。分别用测定稀释液A和B将它们稀释至工作浓度100倍。

洗涤液 - 将20 mL的洗涤液浓缩液（30倍）与580 mL的去离子或蒸馏水稀释，制备600 mL的洗涤液（1倍）。

TMB底物 - 用无菌吸头吸取所需剂量的溶液，不要将残余溶液重新倒入瓶中。

 

注意：

不允许直接在孔中进行连续稀释。

请在测定前15分钟内准备标准品。请不要直接在37°C下溶解试剂。

请根据说明书仔细重组标准品或工作检测试剂A和B，并避免产生泡沫，轻轻混合直至晶体完全溶解。为了减少移液引起的不精确性，请使用小体积，并确保移液器已校准。建议一次性吸取超过10μL。

重组的标准品、检测试剂A和检测试剂B只能使用一次。

如果洗涤液浓缩液（30倍）中形成晶体，请加热至室温并轻轻混合，直至晶体完全溶解。

受污染的水或试剂准备容器会影响检测结果。

 

样本准备：

建议使用新鲜样本，避免长时间储存，否则样本中的蛋白质可能会降解和变性，导致假结果。因此，样本应在2 - 8°C下短期储存，或分装后在-20°C（≤1个月）或-80°C（≤3个月）下储存。应避免反复冻融。测定前，冷冻样本应缓慢解冻并离心以去除沉淀物。

如果说明书中未指定样本类型，需要进行初步测试以确定与试剂盒的兼容性。

如果使用裂解缓冲液制备组织匀浆或细胞培养上清，引入的化学物质可能会导致偏差。推荐的稀释因子仅供参考。

请在进行测试前估算样本的浓度。如果值不在标准曲线范围内，则必须确定特定实验的最佳样本稀释度。然后，应使用PBS（pH =7.0-7.2）稀释样本。

测定精度

内部测定精度（测定内的精度）：在一块板上分别测试3个低、中、高目标水平的样本，每个样本测试20次。

外部测定精度（测定间的精度）：在3个不同的板上测试3个低、中、高目标水平的样本，每个板上8个重复。

CV(%) = SD/meanX100

内部测定：CV < 10%

外部测定：CV < 12%

 

标准曲线：

文献参考：

Palladini, Cagna, Di Pasqua, Adorini, Croce, Perlini, Ferrigno, Berardo, Vairetti: "Obeticholic Acid Reduces Kidney Matrix Metalloproteinase Activation Following Partial Hepatic Ischemia/Reperfusion Injury in Rats." in: Pharmaceuticals (Basel, Switzerland), Vol. 15, Issue 5, (2022)

Mousa, Alhumaydhi, Abdellatif, Abdulmonem, AlKhowailed, Alsagaby, Al Rugaie, Alnuqaydan, Aljohani, Aljasir, Alwashmi, Soliman, Yosof, Elsheikh, Babiker, Alsuhaibani, Hegazy, Seleem: "Curcumin and ustekinumab cotherapy alleviates induced psoriasis in rats through their antioxidant, anti-inflammatory, and antiproliferative effects." in: Cutaneous and ocular toxicology, pp. 1-10, (2021)

Ma, Zhao, Zhang, Chen: "Intra-arterial human urinary kallidinogenase alleviates brain injury in rats with permanent middle cerebral artery occlusion through PI3K/AKT/FoxO1 signaling pathway." in: Brain research, Vol. 1687, pp. 129-136, (2019)

 

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