SP2/0 与 NS-1｜两种骨髓瘤细胞融合伴侣的杂交瘤细胞培养要点

摘要：SP2/0 与 NS-1 是两种常用的小鼠骨髓瘤融合伴侣，两者在生长习性、融合表现与筛选结果上存在差异，本文梳理各自要点。

关键词：SP2/0、NS-1、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞融合、杂交瘤细胞培养、HAT 筛选、集落形成率、单克隆抗体

融合伴侣决定了一半的起点。SP2/0 与 NS-1 都是 HGPRT 缺陷株，都能在 HAT 筛选中被清除，区别在来源与生长习性。选哪一个，往往在开题时就定了，但它对后续集落数与检测背景确有影响。

NS-1 来自 P3×63Ag8 系，细胞偏贴壁、形态较扁，融合后集落多成团生长。成团的好处是镜下容易识别，坏处是团内可能混有多个克隆，单克隆化时要更仔细地确认单细胞孔。它的增殖速度较快，扩增阶段不易掉队。

SP2/0 不分泌自身免疫球蛋白重链，上清背景更干净，做 ELISA 检测时干扰相对少，不少抗体发现项目因此优先选它。代价是它对低密度条件更敏感，铺板后前期生长偏慢。

无论选哪一种，融合前的状态准备是一样的：骨髓瘤细胞要处于对数生长期、活率在九成以上、形态均一，不能有成团或颗粒化。细胞状态不好时，融合率与后续集落数都会下降，这种下降与融合伴侣的选择无关，容易被误判为体系问题。

培养条件上也有细微差别。NS-1 贴壁倾向更强，传代时消化或吹打要更充分，否则成团细胞会影响铺板均匀性；SP2/0 悬浮性更好，但也更容易在换液时被吸走，操作时需注意弃液方式。

融合比例上，脾细胞与骨髓瘤细胞常按 5:1 至 10:1 配比。骨髓瘤细胞过量会产生大量无法存活的融合产物，脾细胞过量则浪费且增加背景。这个比例与融合伴侣的种类关系不大，更多取决于脾细胞的活率与得量。

在低密度铺板阶段，两者表现也不同。同一批补剂条件下，NS-1 体系的单克隆化成功率通常更高，SP2/0 略低，但仍高于常规培养基。具体数据上，Hybriboost 组 NS-1 出现集落的孔约 90%–96%，SP2/0 约 66%–89%。

图 1 Hybriboost 提高杂交瘤的融合克隆效率（NS-1 与 SP2/0）

选择时可以这样考虑：后续检测依赖上清抗体信号、希望背景低的，用 SP2/0；追求融合后集落数量与稳定扩增的，用 NS-1。已有验证数据显示，Hybriboost 在两种体系中均可使用，融合后集落数均高于常规培养基与饲养层组。

换体系时建议保留原体系的对照数据。不同实验室的血清、铺板密度与操作习惯差异很大，文献里的具体数值未必能复现，用自己的对照跑一遍更可靠。

还有一点与检测相关：SP2/0 不分泌自身重链，但并不意味着上清中不含蛋白。血清中的蛋白、细胞碎片与死亡细胞释放的组分同样会进入上清。若要降低背景，除了选融合伴侣，还需在取样前离心去除碎片，并统一稀释倍数。若两种体系都要用，建议分别保留各自的对照数据，不要拿一个体系的结论去推另一个。融合伴侣只是起点之一，饲养层或补剂的支持力度、血清批次与铺板密度，对集落数的影响同样不小，比较体系时应把这些条件对齐。

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