1YR企业会员
发布人：杭州斯达特生物科技有限公司
发布日期:2026/11/14 11:21:14
中性粒细胞在肿瘤里占比不高，却常左右免疫治疗的走向。直接染流式，信号会被单核细胞和巨噬细胞压住。先把它们分出来，纯度和活率才谈得上。
实体瘤里的中性粒细胞占比不高，却常在免疫反应的走向里扮演关键角色。直接拿肿瘤单细胞悬液染流式，这群细胞的信号很容易被单核细胞和巨噬细胞压过去。我们用一块0.44g的小鼠MC38肿瘤把整套流程走了一遍，中性粒细胞纯度从分选前的14.8%提到分选后的79.9%。
肿瘤微环境里的中性粒细胞常被称作TAN，参与肿瘤发生、血管生成，也影响免疫治疗的应答。它们在肿瘤浸润免疫细胞里通常只占一小部分，状态却很杂。低丰度的类群怎么才能被测到？混着单核细胞和巨噬细胞的功能实验，结论又要打多少折扣？先把目标细胞拿到手，后面每一步都好推进。
实体瘤样本本身也不省心。组织要先酶解成单细胞悬液，消化时间短了细胞图解不开，拖长了细胞表面抗原会被切掉，磁珠标记的效率跟着下降。中性粒细胞又偏娇气，操作环节一多，活率和回收率就往下走。流程设计上我们尽量把步骤压紧，把离心转速和孵育条件固定下来。
图片来源：斯达特官网技术软文
样本准备与组织消化。取MC38细胞构建的C57小鼠肿瘤，称重0.44g，剪碎后加组织消化液解离成单细胞悬液，再过70μm细胞筛网去掉没消化开的小块。
Percoll预富集。肿瘤单细胞悬液里髓系细胞不少，目标细胞仍需要一次预富集。把悬液铺到40%和80%的Percoll梯度上离心，收集界面层细胞。预富集之后上柱的细胞总量明显下降，非特异吸附也跟着减少。
磁珠标记。每份样本取15 μL S0K0027，同时加15 μL S0B0599，混匀后2–8 °C避光孵育15 min。FcR阻断这步别省。中性粒细胞表面表达Fcγ受体，不加阻断剂时磁珠抗体的Fc段会被受体拽走，背景升高，纯度也会掉下来。
上柱分选。标记完成后，把细胞悬液加进置于磁场中的S0D3012分选柱，未标记的细胞随流出液走，这部分就是阴性组分；把柱子移出磁场，加压洗脱截留在柱内的细胞，得到的就是阳性组分。本次在S0D3004分选器上完成，配S0D3005分选架，全程使用S0D3018分选缓冲液。
分选前，按FSC/SSC淋巴细胞门、单细胞门、CD45+门逐级圈选，CD11b+Ly6G+的中性粒细胞占14.8%。
图片来源：斯达特官网技术软文
图1分选前：MC38小鼠肿瘤单细胞悬液按淋巴细胞门（63.0%） → 单细胞门 (65.1%) → CD45+ 门 (20.6%) → CD11b+Ly6G+ 门逐级圈选，中性粒细胞占14.8%。
分选后，阳性组分里CD45⁺ 细胞占96.9%，其中S0B1808与S0B5293双染的中性粒细胞纯度达到79.9%；同一次分选的阴性组分里，中性粒细胞只剩0.85%。
图2分选后阳性组分：CD45⁺ 细胞占96.9%，其中CD11b⁺Ly6G⁺ 中性粒细胞纯度79.9%。
图3分选后阴性组分：中性粒细胞仅占0.85%，说明Ly6G+细胞大部分被分选柱截留。
Percoll预富集不是可选项。肿瘤组织的髓系细胞比例偏高，省掉预富集，上柱的细胞量会翻上去，磁珠相对不够用，纯度和回收率会一起往下掉。
孵育条件要守。15μL磁珠配15μL FcR阻断剂、避光孵育15 min，是本次验证过的配比。细胞量放大时所有试剂按比例同步增加，别只加磁珠不加阻断剂。
洗脱体积和回收率之间存在拉扯。柱子洗脱得越猛，出来的细胞越多，纯度会松一些；洗脱保守一点，纯度好看，回收率就要认。79.9%的纯度和51%的回收率，就是这次在这个区间里取的平衡点。
活率比纯度更值得盯。中性粒细胞在体外很容易凋亡，本次分选后活率97.4%，靠的是消化、离心、孵育各个环节都不拖时间。样本处理拖过两小时，再好的柱子和磁珠还救得回来吗？
这套配置覆盖从磁珠标记到流式鉴定的完整环节，货号可点开查看各产品的参数与操作说明。
表1 的 8 个货号分三组：磁珠与检测用 S0K0027（￥3,500，现货）、S0B0599（￥180）、S0B1808（￥280）、S0B5293（￥430，现货）；硬件 S0D3004（￥8,550）、S0D3012（￥1,710）、S0D3005（￥1,350）；缓冲液 S0D3018（￥160）。
| 货号 | 产品名称 | 商品参数 | 参考货期 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|---|---|
| S0B0599 | Mouse FcR Blocking Reagent | 来源 : Rat 标记 : Unconjugated | ￥180 | ||
| S0B1808 | FITC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70) | 来源 : Rat 标记 : FITC | ￥280 | ||
| S0B5293 | PE Rat Anti-Mouse Ly6G Antibody (1A8) | 来源 : Rat 标记 : PE | 现货 | ￥430 | |
| S0K0027 | Anti-Ly-6G NanoBeads , mouse（RUO） | 现货 | ￥3,500 | ||
| S0D3004 | Starter MagSep Separator (8S) | 现货 | ￥8,550 | ||
| S0D3012 | S Separation Columns | 现货 | ￥1,710 | ||
| S0D3005 | MultiStand | 现货 | ￥1,350 | ||
| S0D3018 | Starter MagSep Separation Buffer | 现货 | ￥160 |
数据来源：斯达特（Starter）官网产品页 S0B0599、S0B1808、S0B5293、S0K0027、S0D3004、S0D3012、S0D3005、S0D3018，信息检索时间2026-11-14
整套流程里最容易被省掉的是 Percoll 预富集和 FcR 阻断，这两步一省，纯度和回收率一起往下走。0.44g 肿瘤做到 79.9% 纯度、97.4% 活率、51% 回收率，落点不算极致，但够接着做下游。你的样本量，撑得住一次小体积预实验吗？
相关新闻资讯
