Milatuzumab：精准干扰CD74信号，揭示肿瘤细胞存活与凋亡新机制

■ 1. 背景介绍

▲ Milatuzumab (T77478)，CAS: 899796-83-9的化学结构式

Milatuzumab (T77478)，CAS: 899796-83-9 是一种针对CD74的重组人源化单克隆抗体。CD74为Ⅱ型跨膜蛋白，除作为MHC II不变链外，亦充当MIF的受体，并与CD44等共受体协同，启动以存活/黏附为导向的信号通路[1]。Milatuzumab结合CD74后在受体近端直接扰动该轴，迅速促进活性氧（ROS）积累与线粒体膜电位（ΔΨm）丧失，最终诱导细胞死亡。ROS在此既是上游触发因素又是线粒体功能障碍的放大器，而ΔΨm的崩解标志着生物能量学失败与死亡程序的推进，显示其核心作用点位于以线粒体为中心的内源性应激通路。

在CD74信号网络中，MIF–CD74相互作用可动员下游激酶与转录程序（如趋向NF-κB的通路）以支持存活与黏附[1]。Milatuzumab通过占据CD74，减少其与配体结合的可用性并重塑膜微结构。与此一致，Milatuzumab降低了膜上CD20/CD74聚集体，提示其破坏了将受体占据与信号通量耦联的多分子簇。同时，Milatuzumab削弱细胞黏附，表明CD74受扰与黏附依赖性生存线索的衰减相关。氧化应激、线粒体去极化与黏附丧失三者相互作用，构成其诱导细胞死亡的机制框架。

这些特性赋予Milatuzumab显著的研究价值。其一，可作为精确工具急性扰动CD74依赖性信号，用于解析受体近端事件、共受体（如CD44）的参与，以及与CD20等表面分子在膜微域内的串扰[2]。其二，因其稳定提升ROS并导致ΔΨm崩解，适用于氧化还原与线粒体检查点研究（例如DCFH-DA检测ROS、JC-1/TMRM评估ΔΨm）。其三，其降低黏附的能力有助于揭示CD74调控的黏附程序如何与存活信号整合，为探索受体簇集、细胞骨架联动与细胞命运的耦合提供手段。其四，作为选择性探针，Milatuzumab可用于按功能性CD74依赖度对细胞群进行分层，比较ROS生成、线粒体去极化动力学与死亡诱导的敏感性，从而描绘不同细胞类型/状态中CD74通路的权重[1,2]。

■ 2. 文献分享

■ 2.1 Targeting CD74 may mitigate immune-escape features and enhance BCMA CAR-T activity in preclinical models of relapsed/refractory multiple myeloma.

▲ 治疗前、缓解期、复发期骨髓单细胞转录组测序分析。 (A) 流式细胞术 CD38-FITC/CD138-PE 圈选浆细胞比例，分别为治疗前 56.00%、缓解期 0.20%、复发期 30.00%； (B) 单细胞转录组整体实验流程：骨髓单个核细胞分离→单细胞悬液制备→文库构建→上机测序→数据分析与可视化； (C) 治疗前后细胞 UMAP 降维聚类分群及细胞亚群编号； (D) 治疗前与治疗后各免疫细胞亚群 UMAP 分布图，注释单核细胞、T/NK 细胞、浆细胞、中性粒细胞等细胞类型； (E) 特征基因点图，圆点大小代表基因表达细胞占比，颜色深浅代表平均表达量； (F) 各细胞亚群标志基因特征表达 UMAP 分布图； (G) 堆叠柱状图展示治疗前后各类免疫细胞占比变化。

Milatuzumab (T77478) 在本研究中被明确为抗CD74单克隆抗体，并与BCMA CAR-T联合评估其作用。与BCMA CAR-T联用时，Milatuzumab 有效抑制了CAR-T诱导的肿瘤残留细胞CD74上调。具体而言，在骨髓、脾脏与肝脏中，CD74表达降至接近背景水平，统计学检验分别为p=0.0100、0.0003及<0.0001。匹配肿瘤组织的免疫组织化学结果进一步佐证上述发现：在仅给予CAR-T时出现的CD74与MIF表达增强以及CD38+细胞丰度下降，均在联合Milatuzumab后得到部分逆转。在整体功效方面，联合组表现突出：与其他处理组相比，Milatuzumab 加BCMA CAR-T 的小鼠组显示更低的肿瘤负荷、更长的生存时间，以及更为显著的反应强度。综上，Milatuzumab 作为抗CD74分子，在与BCMA CAR-T联合时，能够抑制残留疾病中的适应性CD74上调，促成与降低CD74/MIF信号一致的组织学改变，并带来包括降低肿瘤负荷与延长生存在内的积极抗肿瘤效应。[3]

■ 2.2 A novel CAR-T cell product targeting CD74 is an effective therapeutic approach in preclinical mantle cell lymphoma models.

Milatuzumab (T77478) 被描述为一种针对CD74的全人源化裸抗，作者强调其在套细胞淋巴瘤领域的前期研发工作。基于该抗体的应用，研究显示CD74在该疾病中是可行的靶点。此外，论文报告当CD74表达增强时，与Milatuzumab介导的套细胞淋巴瘤细胞死亡呈正相关，提示更高的抗原水平与更强的抗体细胞毒效应一致。在临床层面，多项试验中Milatuzumab表现出良好的安全性，最常见的不良事件为输注相关反应。在一项复发/难治性慢性淋巴细胞白血病的I–II期研究中，对于获得短暂应答的患者，每次输注后均观察到非恶性淋巴细胞计数显著升高，体现出与给药相关的可测量药效学变化。总体而言，本文将Milatuzumab定位为一款对CD74具备作用的抗体，其前临床活性与抗原表达水平相关，同时结合临床研究中关于良好安全性及部分应答者非恶性淋巴细胞上升的报道，支持针对CD74这一方向的可行性与生物学效应。[4]

■ 2.3 CD74 interferes with the expression of fas receptor on the surface of lymphoma cells.

▲ Western blot 检测 CD74 蛋白在不同 B 淋巴细胞系及稳转细胞株中的表达水平，β-actin 为内参蛋白。 (A) BJAB、Ramos、Raji、Daudi、Jurkat 五株细胞 CD74 本底表达量，下方数值为灰度相对定量值；Jurkat 细胞无 CD74 表达。 (B) 慢病毒敲低 Raji、BJAB 细胞 CD74（编号 35/36/37/39），NT 为未转染对照组；右侧为 BJAB 细胞 Episomal 过表达株（5.7、N.7、Par. 亲本），条带下方数字为归一化后的相对表达量。

Milatuzumab (T77478) 在本研究中被用于评估其对Fas通路介导的凋亡的影响。证据显示，预先以 Milatuzumab 处理能够使BJAB细胞对Fas介导的凋亡更加敏感，说明在Fas通路被激活时，接触该人源化、针对CD74的抗体可增强细胞的凋亡反应。该结果直接来源于BJAB细胞的实验观察，体现了在研究设定的条件下，Milatuzumab 预处理可提升Fas信号依赖的细胞死亡易感性。研究聚焦于Fas介导的效应，所报告的发现表明，在Fas死亡受体通路被触发时，Milatuzumab 能够增强这一凋亡过程，从而在该细胞模型中表现出促进Fas相关凋亡信号的作用。[5]

■ 2.4 CD84 is a survival receptor for CLL cells.

▲ 慢性淋巴细胞白血病（CLL）临床样本中 CD84 表达上调验证。 (A) RT-PCR 检测正常、早期、晚期 CLL 样本 CD84 mRNA 表达，Actin 为内参，数值为相对表达倍数； (B) qPCR 定量统计，CLL 组 CD84 mRNA 表达显著高于正常对照组，*P＜0.0003； (C) RT-PCR 电泳显示 CD84 不同剪接异构体（a/b/c 条带）在各组样本中的转录本差异； (D) 流式细胞术检测正常与 CLL 患者外周血 CD84 阳性细胞比例（正常组 5%，CLL 组 48%），右侧柱状图为荧光表达倍数统计，*P＜0.000002。

Milatuzumab (T77478) 被描述为一种人源化抗CD74单克隆抗体，可阻断由巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）启动的信号级联。研究首先指出，Milatuzumab “blocks the signaling cascade initiated by MIF”，明确其对MIF/CD74轴的抑制作用。在同一研究背景下，作者考察了MIF/CD74通路在慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞中的下游靶点，并聚焦CD84的表达。当使用该抗体阻断CD74时，CLL细胞中的CD84 mRNA水平被“specifically downregulated”，显示Milatuzumab 介导的CD74阻断降低了CD84转录本丰度。上述结果将Milatuzumab的两项相关作用在本研究中联系起来：一是直接抑制经CD74传导的MIF触发信号；二是在CLL细胞中降低CD84 mRNA水平。实验基于同一被界定为人源化抗CD74阻断抗体的制剂完成，并以抗体阻断后对CD84转录本的定量作为读出，从而将Milatuzumab 对MIF/CD74通路的抑制与CD84 mRNA的可测下降相对应，支持其在CLL细胞中调节该信号级联及其转录输出的作用。[6]

■ 3. 结语

Milatuzumab是一种针对CD74受体的人源化单克隆抗体，通过结合CD74干扰MIF/CD74信号轴，扰动受体近端事件，迅速诱导活性氧（ROS）积累、线粒体膜电位崩解及细胞黏附减弱，最终通过以内源性线粒体为中心的应激通路诱导细胞死亡。文献显示，Milatuzumab联合BCMA CAR-T治疗可有效抑制残留肿瘤细胞中适应性CD74上调，增强淋巴瘤细胞对Fas介导凋亡的敏感性，并在慢性淋巴细胞白血病中下调与存活相关的CD84表达。临床研究表明其安全性良好，且具备可测量的药效学变化。未来研究可利用Milatuzumab作为精确工具解析CD74信号依赖性及受体簇集机制，探索其与免疫疗法的协同潜力，并深入研究其在细胞黏附与线粒体检查点调控中的作用，推动肿瘤治疗新策略的发展。

■ 4. Q&A

Q1: Milatuzumab诱导细胞死亡的主要机制是什么？

A1: Milatuzumab通过结合CD74，扰动MIF/CD74信号通路，迅速促进活性氧（ROS）积累、线粒体膜电位丧失及细胞黏附减弱，激活以内源性线粒体为中心的应激通路，最终诱导细胞死亡。

Q2: Milatuzumab联合BCMA CAR-T在多发性骨髓瘤模型中如何增强治疗效果？

A2: Milatuzumab抑制CAR-T诱导的残留肿瘤细胞CD74上调，降低CD74和MIF表达，部分逆转CD38+细胞丰度下降，从而减少肿瘤负荷，延长生存时间，提升整体治疗反应。

Q3: 有哪些证据支持Milatuzumab调节淋巴瘤细胞凋亡通路的作用？

A3: 研究显示，Milatuzumab预处理使BJAB淋巴瘤细胞对Fas介导的凋亡更敏感，表明该抗体增强了Fas死亡受体通路激活时的凋亡反应。