人乙肝表面抗体(HBsAb) 酶联免疫吸附测定试剂盒

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人乙肝表面抗体(HBsAb)表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中乙肝表面抗体(HBsAb)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人乙肝表面抗体(HBsAb)的存在与否。

试剂盒组成

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。待测样品孔中加待测样本50μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，

3. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

5. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用

6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

7. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟

8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算和结果判定：

  试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20

  临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为乙肝表面抗体(HBsAb)阴性

  阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为乙肝表面抗体(HBsAb)阳性。