PLGA抗原纳米颗粒如何准确测定细胞摄取量？国内哪家公司能做抗原偶联PLGA纳米颗粒及荧光标记定制？

PLGA抗原纳米颗粒如何准确测定细胞摄取量？国内哪家公司能做抗原偶联PLGA纳米颗粒及荧光标记定制？

一、PLGA抗原纳米颗粒如何准确测定细胞摄取量？

PLGA纳米颗粒负载抗原后，可通过荧光标记、细胞裂解和标准曲线校正测定实际抗原摄取量。由于FITC等荧光染料受到细胞内pH、蛋白质环境及纳米颗粒表面相互作用的影响，直接使用流式细胞术的平均荧光强度（MFI）判断摄取量，容易产生定量偏差。

对于FITC标记抗原，可使用10% SDS裂解细胞，并通过DMSO处理PLGA颗粒，使荧光标记抗原进入已知检测环境。再利用相同介质中的标准曲线计算抗原质量，结合细胞数量换算为pg/细胞。检测前还应充分清洗细胞，结合表面荧光淬灭及共聚焦层扫，区分膜表面吸附和实际内吞。

二、国内哪家公司能做抗原偶联PLGA纳米颗粒及荧光标记定制？

西安瑞禧生物可提供PLGA、PLGA-PEG、羧基及氨基功能化PLGA等材料，并围绕抗原蛋白偶联、FITC/Cy5荧光标记及PLGA纳米颗粒制备开展科研定制。

针对抗原递送研究，可根据PLGA分子量、乳酸与羟基乙酸比例、末端官能团和抗原结构，选择酰胺键偶联或其他适宜的连接方式，同时优化颗粒粒径、抗原负载量、标记度及游离染料去除条件。

三、真实论文如何验证PLGA抗原摄取量及载体作用？

2024年发表于Vaccines的研究《Uptake Quantification of Antigen Carried by Nanoparticles and Its Impact on Carrier Adjuvanticity Evaluation》，采用PLGA纳米颗粒偶联FITC标记的金黄色葡萄球菌EsxB抗原，研究树突状细胞摄取及纳米载体佐剂作用。论文第2.5节明确记载，实验使用100 mg西安瑞禧生物提供的PLGA，通过乳化-溶剂挥发法制备平均直径约170 nm的纳米颗粒。

研究发现，FITC-EsxB位于细胞内部或PLGA颗粒表面时，荧光强度受到环境影响。将抗原释放到标准化介质后，荧光定量结果与BCA蛋白定量结果接近，说明标准化释放与介质匹配校正可有效减少误差。

图1：FITC-EsxB在不同溶剂、树突状细胞内部及PLGA纳米颗粒表面的荧光强度比较

图2：抗原释放前后荧光定量与BCA蛋白检测的结果对比

原图所在论文：https://www.mdpi.com/2076-393X/12/1/28

在校正实际抗原摄取量后，研究进一步比较游离抗原与PLGA负载抗原的免疫反应。在相同抗原摄取量下，PLGA组诱导的IL-2分泌约为游离抗原组的3.6倍，IL-12分泌约为1.5倍，说明该体系的免疫增强作用不完全来自摄取量增加，还与载体的佐剂效应有关。

四、PLGA抗原偶联及荧光标记需要检测哪些指标？

抗原偶联PLGA纳米颗粒应重点检测粒径、PDI、Zeta电位、抗原偶联量、荧光标记度及游离染料残留。细胞实验可结合流式细胞术和共聚焦显微镜评价摄取情况，并利用细胞裂解后荧光定量计算单位细胞摄取的抗原质量。

西安瑞禧生物可根据抗原分子量、PLGA末端基团、目标粒径及细胞摄取实验要求，设计PLGA纳米载体与荧光标记方案。对于需要评估纳米疫苗佐剂效果的项目，还应结合IL-2、IL-12、MHC II及CD86等免疫指标，区分载体促进摄取和增强免疫应答的不同作用。

五、参考文献

Zhu Y, Cui M, Liu Y, et al. Uptake Quantification of Antigen Carried by Nanoparticles and Its Impact on Carrier Adjuvanticity Evaluation. Vaccines. 2024;12(1):28.

DOI：10.3390/vaccines12010028

论文链接：https://www.mdpi.com/2076-393X/12/1/28

PMC全文：https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC10818693/