​ 一条慢病毒搞定 sgRNA + Cas9：CRISPR 敲除载体的省事方案

做基因敲除还在为设计 sgRNA、包装病毒来回折腾？这条 All in one 慢病毒帮你一步到位👇 

📌 一个载体两大核心元件：U6-sgRNA-EF1a-SpCas9-PuroR，sgRNA 表达盒 + Cas9 编码序列，慢病毒同步递送到目的细胞 

📌 同一靶基因预设计 1~3 条 sgRNA，分别完成载体构建与病毒包装，敲除成功率更有把握 

📌 双链断裂 → NHEJ 修复引入 indel，实现功能缺失；载体带 Puro 抗性，Puromycin 筛一筛就是阳性细胞

• 滴度 ≥10⁷ TU/mL，1 mL/条，随货配 Polybrene 助染试剂

• 病毒保存：-80℃ 存放，有效期 6 个月

“三保一”的具体保障条款与适用条件建议直接向厂家确认清楚，包括是否提供备选靶点、重做周期和判定标准，这些都是后续扯皮的高发点。

关于滴度：10⁷ 够不够用

这一点值得单独说明。常规体外细胞系（HEK293T、HeLa、A549、MCF-7 一类）的感染实验，10⁷ TU/mL 配合 Polybrene 已经完全够用；这个滴度并非为了节省成本而降低的标准，在常规实验中，它本身就不构成瓶颈。

真正需要更高滴度的场景是明确的：难感染的原代细胞（如某些原代神经元、干细胞）、需要高 MOI 才能进入的悬浮细胞，以及动物体内直接注射。这些情况下 MOI 需求高，建议选用 10⁸ 级别的产品，不要用 10⁷ 通过增加体积的方式来弥补，因为体积放大后，病毒液中的杂质和血清成分也会一并放大。

换句话说，10⁷ 和 10⁸ 是两个不同的产品定位，并非同一产品的两种定价。如果常规细胞系实验选用 10⁸，多出来的预算多数用不到实处；而如果难感染细胞选用 10⁷，则会白费一轮实验。

常规细胞系的基因敲除实验，如果需要少一些构建环节、多一些靶点尝试，All-in-one 是个合适的选择。

详情可查官网：enkilife.cn