一种乙酰基四肽-9的液相方法

概述

乙酰基四肽-9是一种由四个氨基酸残基（谷氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、组氨酸）的合成肽物质，常温下表现为白色粉末。该物质的N-端经乙酰化修饰，这种结构赋予其良好的稳定性和皮肤渗透能力，此外，该物质还可以通过激活真皮层成纤维细胞，增加胶原蛋白和弹性蛋白的分泌，提升皮肤紧实度，尤其对眼周等脆弱区域的松弛问题有针对性效果。

乙酰基四肽-9  化学结构式

随着其在护肤品中的应用日益广泛,高效、经济且环境友好的合成与纯化方法成为相关领域的研究重点。传统的液相肽合成法虽可用于片段缩合,但步骤繁琐、总收率偏低,难以满足工业化需求。并且,单次色谱分离难以同时实现高分辨率与高回收率。本文提供一种合成乙酰四肽-9的方法,提高分离效率、分辨率,提高产品纯度和收率。

合成方法

1、取多种固相合成树脂,并对所述多种固相合成树脂加入溶胀剂,并加入缩合剂、活化剂溶解并冷却,冷却温度为-10℃,冷却时间为20-30分钟;将缩合剂加入冷却的所述固相合成树脂和所述缩合剂、活化剂的体系中溶解,偶联2-5.5小时并洗涤,得到所述肽链。以最大限度地抑制副反应、提高偶联效率,并确保最终肽链序列的准确性。

2、对所述肽链进行裂解分离，包括:将前序过程完成合成并充分洗涤、干燥后的肽树脂复合物转移至专用的裂解反应器中。加入预先配制并冷却至低温的裂解液,然后在室温下进行搅拌反应。反应时间通常控制为2-3小时。此温和的温度与足够的时间窗口,确保了裂解与脱保护反应完全,同时最大程度地减少了因强酸长时间作用可能引发的肽链降解或副反应。裂解完毕后,可以采用三氟乙酸进行洗涤和分离,得到乙酰基四肽-9粗肽产品。

3、对所述粗品目标肽用少量A相（三氟乙酸水溶液）溶解并过滤后,上样至第一液相色谱柱。第一液相色谱柱可以选用300DAC动态柱,填料为Daiso-C18-8-100,波长为230nm,流速为1600mL/min。通过第一液相色谱柱的第一梯度洗脱进行高通量、大载量的初步分离,快速去除大部分理化性质与目标肽差异显著的杂质。

4、将所述洗脱液馏分上样至第二液相色谱柱,使用A1相(乙酸铵水溶液)、A2相(乙酸水溶液)和B相（乙腈）构成的洗脱液进行第二梯度转盐洗脱,经过浓缩、冻干后得到精品后的乙酰基四肽-9。