禽类应激难量化？ACTH ELISA Kit一步法更高效

1. 鸡ACTH在禽类应激研究中为何值得检测？

促肾上腺皮质激素（ACTH）由垂体前叶合成，是下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴的核心效应激素，可刺激肾上腺皮质分泌皮质酮。禽类热应激模型、饲养密度与动物福利评估中，血浆ACTH是判断HPA轴激活程度的直接读数。货号abs554750的Chicken ACTH ELISA Kit以鸡促肾上腺皮质激素为靶标，体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中的ACTH含量，96T规格可满足批量禽类样本筛查。

2. Chicken ACTH ELISA Kit的双抗体一步夹心法原理是什么？

该试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。微孔预先包被鸡ACTH捕获抗体，依次加入标本、标准品与HRP标记的检测抗体，温育并彻底洗涤后加入底物TMB显色；TMB在过氧化物酶催化下转化成蓝色，在酸的作用下转化成最终的黄色，颜色深浅与样品中鸡ACTH呈正相关，用酶标仪在450nm波长测定吸光度并计算浓度。一步法把抗原与检测抗体放在同一孵育步骤，流程更短，但要求加样迅速、孔间温育时间差尽量小。

3. 鸡血清与血浆样本前处理怎么做？

血清：全血室温放置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟取上清。血浆：EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内于2-8℃、1000×g离心15分钟取上清。组织匀浆：预冷PBS（0.01M，pH=7.4）冲洗去血，按1:9重量体积比加PBS（1g组织对应9mL PBS）冰上研磨，可超声破碎或反复冻融，5000×g离心5-10分钟取上清。标本溶血会影响检测结果，溶血标本不宜检测；所有样本避免反复冻融。

4. Chicken ACTH ELISA Kit检测范围与灵敏度如何解读？

该试剂盒检测范围2.5-80 pg/mL，最低检测浓度小于0.1 pg/mL，标准品浓度依次为80、40、20、10、5、2.5 pg/mL；不与其它可溶性结构类似物交叉反应，板内变异系数小于10%、板间小于15%。操作上标准品孔与样本孔各加50μL，除空白孔外每孔加HRP标记检测抗体100μL，37℃温育60分钟；洗板5次（每孔350μL洗涤液静置1分钟），加底物A、B各50μL，37℃避光15分钟，加终止液50μL后15分钟内在450nm读数。试剂盒2-8℃保存，有效期6个月。

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