新品上市 I THUNDE TR-FRET磷酸化RIPK1

RIPK1是一种参与调节炎症和细胞死亡的细胞内蛋白。RIPK1在几种炎症反应中被激活，尤其是通过肿瘤坏死因子受体1调节（TNF-α）信号通路。RIPK1被磷酸化，并与包括RIPK3和混合谱系激酶结构域(如假激酶)的蛋白复合物相互作用。溃疡性结肠炎（UC）、多发性硬化症（MS），肌萎缩侧索硬化症（ALS）、阿尔茨海默症（AD）等人类疾病中RIPK1活性增加，抑制RIPK1活性在这些慢性疾病中是有效的。RIPK1抑制剂目前作为治疗全身性炎症性疾病,包括炎症性肠病（IBD）和银屑病的热门靶点。

THUNDER TR-FRET时间分辨荧光共振能量转移是一种基于荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和时间分辨荧光（TRF, Time-Resolved Fluorescence）的技术，采用夹心法，检测胞内RIPK1磷酸化水平和总RIPK1水平。
 

图1：THUNDER TR-FRET检测原理示意图

HT-29细胞（10万细胞/孔；三复孔）与25µM的Z-VAD（OMe）-FMK在37℃孵育20分钟，然后将连续稀释的Necrostatin-1S与SM-164一起加入，终浓度为100nM；细胞在37°C再孵育10分钟。最后，以终浓度为0.17pM的TNFa和细胞在37°C时孵育6小时。数据显示，用Necrostatin-1S处理HT-29细胞可以抑制TNFa对RIPK1（S166）位点的磷酸化。
 

图2：磷酸化RIPK1和总RIPK1验证数据

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*磷酸化/总蛋白检测试剂提供以下规格：100 points，500 points，2500 points，5000 points，10000 points。