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小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析

发布人:杭州斯达特生物科技有限公司

发布日期:2026/10/2 18:14:52

小鼠体内清除中性粒细胞,难点不在打一针抗体,而在清除效率可量化、可重复。Ly-6G 把这一步变成了标准动作:抗体清除加流式绝对计数,配对做才有说服力。

一、为什么 Ly-6G 是中性粒细胞研究的首选标志物?

中性粒细胞(Neutrophils)是机体抗感染免疫的第一道防线,同时在肿瘤微环境、组织修复及自身免疫性疾病中发挥关键调控作用。在小鼠模型研究中,Ly-6G(淋巴细胞抗原6G)是目前公认的中性粒细胞核心表面标志物。

Ly-6G 属于 Ly-6 超家族的 GPI 锚定蛋白,分子量约为 21-25 kDa,在成熟中性粒细胞上高度特异性表达。它不仅是中性粒细胞研究的"分子标签",更是体内功能学研究中抗体介导清除策略的理想靶点。

小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析

图片来源:斯达特官网技术软文

二、体内清除中性粒细胞,实验思路怎么设计?

项目具体内容
样本来源正常小鼠 & IMR32荷瘤SCID鼠
干预处理使用抗体/对照清除体内中性粒细胞,观察功能变化
实验组:鼠源化抗-Ly6G(克隆1A8,小鼠IgG2a),设置剂量梯度(25 μg、50 μg、100 μg)。
阳性对照组:传统大鼠抗-Ly6G(Rat IgG2a,Bio X Cell),剂量50 μg或100 μg。
阴性对照组:PBS(溶剂对照)
在IMR32荷瘤SCID鼠中,给予IgA ch14.18抗体 + SIRPα-D1融合蛋白(用于人为招募中性粒细胞入瘤),同时给予鼠源化抗-Ly6G观察能否清除瘤内已聚集的细胞
检测方法血液样本:通过面颊穿刺采血,收集于肝素锂管中,立即置于冰上(防止CD115(CSF1R)内化,确保单核细胞门控准确)。
肿瘤组织样本(IMR32荷瘤模型):第70天处死后切除肿瘤,剪碎,使用小鼠肿瘤解离试剂盒进行标准化酶解消化,过70 μm细胞筛获得单细胞悬液。
流式分型检测+绝对计数
实验目的将大鼠源抗-Ly6G(IgG2a,仅能激活Fc依赖的缓慢清除)进行鼠源化改造为小鼠IgG2a同型。小鼠IgG2a是唯一能同时高亲和力结合所有活化性Fcγ受体(FcγRI/IV)并高效结合C1q(激活补体CDC)的同型,应能实现"三通路齐发"(ADCC+ADCP+CDC),达到高效、持久、单药单用的清除效果

三、清除效果如何验证,结果说明该怎么读?

小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析

图片来源:斯达特官网技术软文

小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析

小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析

四、流式检测要避开哪些坑?

为确保流式检测结果的准确性和可靠性,实验中需特别注意以下关键点:

1. 避免抗-Ly6G 表位封闭(masking)带来的假阴性

建议使用 CD45 做淋巴细胞圈门,排除 Siglec-F⁺(嗜酸性粒细胞)和 CD115⁺(单核细胞),用 Gr-1(RB6-8C5)⁺ / CD11b⁺ 圈门中性粒细胞。

2. 绝对计数

加入已知数量的微球乳胶珠(microsphere latex beads),计算"每5000个微球对应的中性粒细胞数量",实现标准化绝对定量。

3. 死活排除

肿瘤样本中加入 TO-PRO-3 染料排除死细胞,确保流式数据反映真实活细胞群体。

五、为验证清除效能,做了哪些平行比较?

为全面验证鼠源化抗-Ly6G 抗体的清除效能,我们设置了多维度平行比较:

比较维度具体内容
不同抗体的直接头对头比较鼠源化抗-Ly6G(25/100 μg) vs. 传统大鼠抗-Ly6G(50 μg) vs. PBS,均在同一老龄 C57BL/6J(>20周,最抵抗品系)中进行
不同剂量的纵向比较25 μg(低) vs. 100 μg(高)的鼠源化抗体,观察清除持续时间差异(短效1周 vs. 长效4周)
不同小鼠品系的普适性验证C57BL/6J vs. Balb/c vs. NXG(T/B/NK缺、补体C5缺陷) vs. SCID(T/B缺)
不同解剖位置的清除效率外周血(循环池) vs. IMR32肿瘤微环境(组织浸润池),确认即使被招募到肿瘤内的中性粒细胞也能被彻底清除

小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析

图片来源:斯达特官网技术软文

小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析

六、这套清除与流式鉴定方案,需要配哪些产品?

功能性抗体 & 辅助产品

产品分类产品编号名称规格
功能性抗体S0B1198Invivo Anti-mouse Ly6G monoclonal Antibody1/5/25/50/100 mg
功能性抗体BE0075InVivoMAb anti-mouse Ly6G1/5/25/50/100 mg
同型对照S0B0787Invivo mouse IgG2a isotype control1/5/25/50/100 mg
同型对照BE0089InVivoMAb rat IgG2a isotype control, anti-trinitrophenol1/5/25/50/100 mg
组织消化解离abs50090Mouse tumor tissue dissociation kit.10T/25T/50T
筛网abs723270μm细胞筛网(200目,白色,底面过滤)50个/箱

流式鉴定:Panel 1 Myeloid Panel

靶点荧光素产品编号名称规格
CD11bFITCS0B1808FITC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70)25T/50T/100T
Ly-6CPerCP-Cy5.5S0B1812PerCP-Cy5.5 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4)25T/50T/100T
Ly-6GPE-Cy7S0B5247PE-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly6G Antibody (1A8)25T/50T/100T
Siglec-F (CD170)BV421562681BD Horizon™ BV421 Rat Anti-Mouse Siglec-F25µg/50µg
CD45BV510563891BD Horizon™ BV510 Rat Anti-Mouse CD4525µg/50µg

流式鉴定:Panel 2 Monocyte Panel

靶点荧光素产品编号名称规格
CD11bFITCS0B1808FITC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70)25T/50T/100T
GR-1PE-Cy7S0B8293PE-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) Antibody (RB6-8C5)25T/50T/100T
CD115APCS0B8572APC Rat Anti-Mouse CD115 Antibody (AFS98)25T/50T/100T
Ly-6CAPC-Cy7S0B5909APC-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4)25T/50T/100T
Siglec-F (CD170)BV421562681BD Horizon™ BV421 Rat Anti-Mouse Siglec-F25µg/50µg
CD45BV510563891BD Horizon™ BV510 Rat Anti-Mouse CD4525µg/50µg

流式鉴定:Panel 3 Lineage Panel

靶点荧光素产品编号名称规格
CD3εPES0B1697PE Rat Anti-Mouse CD3 Antibody (17A2)25T/50T/100T
NK1.1PerCP-Cy5.5S0B8101PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Mouse NK1.1 Antibody (PK136)25T/50T/100T
B220/CD45RPE-Cy7S0B5262PE-Cy7 Rat Anti-Mouse CD45R/B220 Antibody (RA3-6B2)25T/50T/100T
CD11bAPCS0B5527APC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70)25T/50T/100T
Ly-6CAPC-Cy7S0B5909APC-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4)25T/50T/100T
CD45Pacific BlueS0B1655Pacific Blue Rat Anti-Mouse CD45 Antibody (30-F11)25T/50T/100T
GR-1Pacific OrangeRM3030Ly-6G/Ly-6C Monoclonal Antibody (RB6-8C5), Pacific Orange™1mL

中性粒细胞清除与流式鉴定,可选哪些产品?

从功能性抗体、同型对照,到组织解离试剂与多色流式 Panel,斯达特(Starter)提供整套配套产品,方便在同一批实验里把清除、圈门与计数一次做齐。相关货号信息如下:

货号产品名称商品参数参考货期规格价格
S0B1198Invivo Anti-mouse Ly6G monoclonal Antibody来源 : Mouse

标记 : Unconjugated
现货 ¥700
S0B0787Invivo mouse IgG2a isotype control来源 : Mouse

标记 : Unconjugated
现货 ¥900
S0B1808FITC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70)来源 : Rat

标记 : FITC
现货 ¥360
S0B1812PerCP-Cy5.5 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4)来源 : Rat

标记 : PerCP-Cy5.5
  ¥1,090
S0B5247PE-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly6G Antibody (1A8)来源 : Rat

标记 : PE-Cy7
现货 ¥770
S0B8293PE-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) Antibody (RB6-8C5)来源 : Rat

标记 : PE-Cy7
现货 ¥600
S0B8572APC Rat Anti-Mouse CD115 Antibody (AFS98)来源 : Rat

标记 : APC
现货 ¥290
S0B5909APC-Cy7 Rat Anti-Mouse Ly-6C Antibody (HK1.4)来源 : Rat

标记 : APC-Cy7
现货 ¥1,000
S0B1697PE Rat Anti-Mouse CD3 Antibody (17A2)来源 : Rat

标记 : PE
现货 ¥500
S0B8101PerCP-Cy5.5 Mouse Anti-Mouse NK1.1 Antibody (PK136)来源 : Mouse

标记 : PerCP-Cy5.5
现货 ¥720
S0B5262PE-Cy7 Rat Anti-Mouse CD45R/B220 Antibody (RA3-6B2)来源 : Rat

标记 : PE-Cy7
  ¥1,693
S0B5527APC Rat Anti-Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70)来源 : Rat

标记 : APC
现货 ¥260
S0B1655Pacific Blue Rat Anti-Mouse CD45 Antibody (30-F11)来源 : Rat

标记 : Pacific blue
现货 ¥510

数据来源:斯达特(Starter)官网产品页 S0B1198、S0B0787、S0B1808、S0B1812、S0B5247、S0B8293、S0B8572、S0B5909、S0B1697、S0B8101、S0B5262、S0B5527、S0B1655,信息检索时间2026-10-02

结语:清除做稳了,模型才立得住

中性粒细胞体内清除的核心是三件事:抗体够不够特异、对照设不设全、圈门有没有排掉干扰。鼠源化抗-Ly6G 走 ADCC、ADCP、CDC 三重机制,清除更持久,相应地,同型对照和微球绝对计数一个都不能省。你的清除实验里,绝对计数做了吗?把这三点固化成标准流程,跨批次的数据才谈得上可比。

小鼠体内中性粒细胞清除技术全解析

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