搞定EAE模型！从抗原选型到造模避坑，多发性硬化研究全攻略

多发性硬化症（MS）作为典型的中枢神经系统自身免疫性疾病，因复杂的免疫发病机制、多样的临床表型，一直是神经免疫领域的研究热点。而小鼠EAE（实验性自身免疫性脑脊髓炎）模型，是目前模拟人类MS病理特征、开展机制研究与药物筛选的金标准动物模型。

但不少科研人坦言：EAE造模看似流程标准化，实则“翻车率极高”。发病率不稳、个体差异大、表型与实验预期不符、病理染色无阳性结果……诸多问题屡屡耽误实验进度。其实EAE建模成功的核心，不在于机械复刻流程，而在于精准选型、严控变量、细节避坑。今天结合成熟实验经验，全方位拆解EAE模型构建核心逻辑与实操要点。

一、为什么EAE模型是MS研究的刚需？

EAE模型通过人工诱导自身免疫细胞攻击中枢神经系统髓鞘，高度复刻人类MS的核心病理与临床特征，完美匹配科研需求：

• 病理高度吻合：精准还原中枢神经炎症浸润、髓鞘脱失、轴突损伤等核心病变
• 免疫机制一致：依托Th1/Th17/B细胞介导的自身免疫反应，贴合人类MS发病机制
• 实验可控性强：病程可预测、指标可量化、重复性高，适配机制探索与药物疗效评估
• 应用场景广泛：可用于免疫机制解析、抗炎/免疫调节药物筛选、B细胞靶向疗法验证等多种研究方向

二、精准选型：选对抗原与品系，建模成功一半

EAE模型无通用配方！动物品系、抗原种类直接决定模型表型与免疫偏向，错选直接导致实验方向偏差，这是多数人建模失败的首要原因。

✨ 品系匹配表型，按需选择不踩雷

• C57BL/6小鼠：主流首选，适配MOG系列抗原，稳定构建慢性进展型EAE，发病平稳、重复性高，适合T细胞机制研究、药物初筛
• SJL/J小鼠：适配PLP系列抗原，可构建复发-缓解型EAE，高度模拟临床最常见的MS复发病程，专注复发机制研究
• Lewis大鼠：适配MBP抗原，造模周期短、发病同步性好，适合快速体内药物验证实验

✨ 抗原细分场景，区分T/B细胞免疫偏向

不同种属、类型的抗原，介导的免疫机制完全不同，直接决定实验核心结论：
• MOG(35-55)短肽（abs815889）：经典T细胞特异性抗原，发病率超90%，稳健经济，仅激活T细胞介导的细胞免疫，不诱导B细胞抗体产生，纯T细胞机制研究、药物初筛首选
• 人源MOG(1-125)全长蛋白（UA010471）：区别于短肽，可同时激活T细胞与B细胞，诱导自身抗体产生，完美模拟MS体液免疫病理，专为B细胞功能研究、抗CD20等抗体药物筛选设计
• [Ser140]-PLP(139-151)（abs45152261）：SJL小鼠专属，复发率50%-80%，发病同步性佳，是复发缓解型MS研究的核心抗原
• PLP(139-151)（abs45153151）：诱导病情更严重、无自发缓解的EAE表型，适合需要重度病理模型的机制研究
• MBP(69-88)（abs45152786）：Lewis大鼠专用，18天即可完成造模周期，快速高效，适配大批量药物初筛验证

三、核心造模体系：标准化流程，把控关键变量

EAE建模四大核心变量缺一不可、不可随意改动：动物品系、抗原剂量、佐剂浓度、PTX给药方案，任一变量偏差都会引发发病率、病程、病理表型的大幅波动。

✅ 标准诱导方案（C57BL/6+MOG35-55经典模型）

1. 抗原乳化：MOG35-55与EAE专用弗氏完全佐剂（FCA）1:1冰上充分乳化，制成油包水乳液，保证乳滴细腻、入水不扩散，是高发病率的基础
2. 免疫接种：小鼠背部皮下多点注射乳液，均匀给药，避免局部鼓包过大或注射过深影响造模效果
3. PTX免疫增强：免疫当天（D0）、48h后（D2）腹腔注射百日咳毒素，破坏血脑屏障完整性，促进免疫细胞浸润中枢，大幅提升建模成功率
4. 周期观测：免疫后10-14天陆续发病，18-21天进入发病高峰期，全程监测体重、临床评分

四、病理检测&实操避坑，告别实验无效数据

造模成功不仅看行为评分，病理染色、分子检测才是模型有效的金标准，同时也是最容易出错的环节。

📌 精准取材，避免漏判病灶
脊髓是EAE病理核心区域，必须完整取颈、胸、腰骶腰膨大多段组织；大脑可取视交叉水平层面，脑干配套包埋，小脑病灶较少可选择性省略。优先选择纵切切片，可观察脊髓全长病灶，检出率远高于常规横切。

📌 双重染色验证，全方位评估病理
• HE染色：炎症浸润评估。通过苏木精-伊红（HE）染色技术，可清晰观察脊髓组织中单核细胞、淋巴细胞及巨噬细胞的浸润情况（图1）。
• LFB染色：脱髓鞘程度分析。丽春红固绿（LFB）染色可特异性标记髓鞘脂质结构，正常髓鞘呈现深蓝色或蓝绿色（图2）。

注意：HE和LFB不能在同一张切片上同时染色，必须分别用不同的切片。推荐使用相邻切片，因为只有相邻切片才能保证两张切片的组织位置一致，才能在同一病灶区域对比炎症和脱髓鞘程度。

图1 Znrf1-/- 小鼠脊髓白质区可见大量炎性细胞浸润（血管周围和实质内散在），信号显著强于野生型[1]。

图2 Znrf1-/- 小鼠脊髓白质区蓝染明显缺失、色浅，提示大面积脱髓鞘；野生型小鼠蓝染保留完整[1]。

📌 高频避坑要点
• 禁止无灌注直接浸泡固定：4%多聚甲醛心脏灌注是保障组织形态、保留抗原性的关键
• 杜绝过早取材：未到发病高峰期取材，炎症、脱髓鞘病灶不典型，易出现病理阴性结果
• 避免单切片判定结果：每只小鼠至少选取3张非连续切片检测，取平均值减少实验误差
• 严控试剂质量：PTX、MOG抗原、FCA佐剂纯度与活性，直接决定造模稳定性，优选高纯度、文献验证的成熟试剂

五、高分文献案例参考

EAE 模型广泛应用于神经免疫领域高水平期刊研究，以下为采用该模型开展的代表性研究案例，可为实验设计、图表呈现提供参考。

案例 1：MOG35-55 诱导 C57BL/6 小鼠 EAE，Tregs 细胞过继转移治疗研究

图3 抗原特异性Tregs的过继转移促进EAE中Th17细胞生成。A：各组的EAE临床评分。B：脊髓切片的代表性组织学图像[2]。

案例 2：MOG35-55 诱导 C57BL/6 小鼠 EAE，SPAK 信号通路靶向干预研究

图 4 ZT-1a 抑制 SPAK，对 EAE 发挥保护作用。A：ZT‑1a 干预 EAE 实验设计；B：各组 EAE 临床评分变化；C：中枢免疫细胞浸润免疫荧光检测；D‑F：定量统计及脊髓病理染色结果 [3]。

六、总结：科学建模，拒绝盲目试错

EAE模型的核心精髓，从来不是“照搬流程”，而是根据实验目的定制方案：研究T细胞炎症、批量初筛药物选MOG35-55；聚焦B细胞与体液免疫选人源全长MOG；探索复发病程选PLP系列抗原。

同时严格把控品系、抗原、佐剂、PTX四大变量，配合标准化取材、染色与检测，就能彻底解决发病率不稳、表型不符、数据无效等问题，轻松搭建稳定、可重复、高分文献认可的EAE实验模型，为神经免疫、自身免疫疾病研究筑牢基础。

爱必信（Absin）提供EAE造模全套高品质试剂，并配备一对一技术支持。同时，我们提供HPLC≥98%纯度的髓鞘相关多肽定制合成服务，覆盖MS/EAE研究所需的各类抗原，助力科研工作者高效推进课题。

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引用文献：
[1] J Neuroinflammation. 2025 Oct 22;22(1):239. doi: 10.1186/s12974-025-03550-z. IF:11.5
[2] Nat Commun. 2025 Aug 16;16(1):7644.doi: 10.1038/s41467-025-62628-7. IF:15.7
[3] J Neuroinflammation. 2025 Mar 13;22(1):80.doi: 10.1186/s12974-025-03407-5. IF:9.3

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