实验常见问题,标准曲线不佳

上海双赢生物秉承“信誉、质量、品牌、诚信为本"的理念，以优良的服务质量和实惠的价格，elisa试剂盒实验前，请仔细阅读中英文说明书，我们提供免费代测，实验过程指导服务。在做ELISA实验的时候加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品*点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等，总结如下原因：
 
    一、标准曲线*点吸光值偏高，超出仪器检测范围
    ELISA标准曲线*点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出仪器检测范围，显示OVER FLOW，可能原因：
 
   1.可能原因：如OD绝对值靠谱，则显色过度
   1.解决方法：TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。
 
   2.可能原因：仅作单波长检测
   2.解决方法： 由于参考波长读取非特异性检测，如指纹、划痕、水渍等，对结果也有影响。建议*终结果以双波长为*准确。
 
   二、标准曲线*点吸光值偏低
 
   ELISA标准曲线*点的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：
 
   1.可能原因：粉末标准品未充分溶解
   1.解决方法：粉末标准品按说明书加一定体积的液体后，轻柔混匀，室温静置30分钟，充分溶解。
 
   2.可能原因：标准品反复冻融
   2.解决方法：标准品反复冻融后活性降低。
 
   3.可能原因：孵育温度、时间
   3.解决方法： 按说明书要求孵育条件进行孵育。
 
   4.可能原因：显色时间控制
   4.解决方法：TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。
 
   三、标准曲线无梯度
 
   ELISA 实验中标准品2倍倍比稀释，但结果分析标准曲线没有梯度，可能的原因：
 
   1.可能原因： 样品或标准品污染
   1.解决方法： 避免污染
 
   2.可能原因：错误的样品或标准品的稀释
   2.解决方法： 完全按照说明书稀释
 
   3.可能原因： 偶联抗体浓度过高
   3.解决方法： 按照说明书调整到*佳的浓度
 
   4.可能原因：TMB底物孵育时间过长
   4.解决方法： 调整到合适的孵育时间
 
   5.可能原因： 错误的孵育时间或温度
   5.解决方法：完全按照说明书
 
   6.可能原因：孵育时未加盖导致溶液挥发和污染
   6.解决方法： 贴封片或加盖