为什么选Fluor488而不选FITC??|绿色荧光|免疫荧光染色

Fluor488是磺化后的罗丹明绿。通过引入两个磺酸根离子，Fluor488的水溶性大大增强，pH稳定性，光稳定性也提高。和荧光素类染料不同，Fluor488的荧光在较宽的pH范围内(4-10)保持不变。由于带多个负电荷，Fluor488不易分子间聚集，多个染料分子标记同一蛋白时，不易荧光自淬灭(self quenching)，或引起蛋白聚集。

Fluor488是荧光素（FITC或FAM）及CY2的优异替代品，用于生物偶联物单分子检测、荧光相关光谱和荧光偏振测量表现极为突出。在荧光显微镜和流式细胞术也得到广泛应用，Fluor488是目前极佳的水溶性小分子绿色荧光染料之一。

图1: Fluor488SE化学结构示意图，显示其分子组成和键合方式

图2: Fluor488激发和发射光谱图

图3: Fluor488近似染料光谱（Cy2, FITC）对比

图4: 对用Fluor 488染料和异硫氰酸荧光素（FITC）制备的山羊抗小鼠IgG结合物的相对荧光强度进行比较。使用相同抗体量, 结果显示Fluor 488标记的抗体具有更高的荧光亮度。

图5: Fluor488 标记兔抗小鼠 IgG 抗体与 Cy2 标记的兔抗小鼠 IgG 抗体的亮度对比。人血细胞样本先用正常兔血清进行封闭处理，然后与抗 CD3 小鼠单克隆抗体一起孵育，细胞经过洗涤、重悬后，分别与相同浓度的Fluor 488 或 Cy2 标记的兔抗小鼠IgG 二抗一起孵育，红细胞裂解后，流式检测，显示Fluor488 标记的二抗效果更优。

图6: 使用Fluor488和FITC直接标记anti Mouse CD4单抗，使用相同抗体量，流式检测信号强度，Fluor488标记的anti Mouse CD4具有更强的荧光信号强度。

参考文献

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EnkiLife（恩玑生命）小分子荧光染料标记试剂盒