猪ELISA试剂盒实验之入门小技巧

猪ELISA试剂盒操作步骤如下：

(1)、将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。

(2)、加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。

(3)、加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。

(4)、加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。

猪ELISA试剂盒洗板时还应注意以下问题：

1、需每天校正注液量及残液量，洗涤后残液量不得大于2μl；

2、及时更换破损吸液针，避免破坏底板包被；

3、针对不同厂家酶标板注意调整吸液头下降高度，避免冲洗针头卡住酶标板；

4、注意调整洗液量，洗液量过多将溢出，过少将达不到洗涤效果；

5、关机前使用蒸馏水冲洗管道，避免洗液的结晶物堵塞管道；

6、不同种试剂盒的洗液严禁混合使用。

猪ELISA试剂盒注意事项：

1．边缘效应使用96孔板的猪ELISA试剂盒测定中，常发现有“边缘效应"，即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规猪ELISA试剂盒测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应"，并且可提高测定的重复性。

2．加样在现在的猪ELISA试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以，有时候一份标本用相同的猪ELISA试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。