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引物或探针发生降解该如何补救

发布人:上海抚生实业有限公司

发布日期:2026/4/7 8:51:37

引物或探针降解后无法修复,唯一的补救措施是重新合成高质量的引物或探针,并优化储存条件以防止再次降解‌。

一旦确认引物或探针已降解(如通过PAGE电泳显示条带模糊、拖尾或弥散),原有试剂已失去特异性结合能力,无法参与有效扩增,必须更换新批次。为避免后续实验受影响,建议采取以下措施:

1重新合成与质量把关

选择信誉良好的供应商,确保引物纯度(如HPLCPAGE纯化级别)。

合成后立即进行质量验证:使用‌PAGE电泳‌或‌毛细管电泳‌检测完整性,确认无降解;通过‌OD260/280比值‌评估纯度(理想值1.82.0),排除蛋白或有机溶剂污染。

2、优化储存方式

分装保存‌:将引物或探针小量分装,避免反复冻融导致的物理损伤。

储存浓度‌:引物储存浓度不应低于10 μM,推荐以100 μM储备液形式存放,提高稳定性。

溶剂选择‌:使用含0.1 mM EDTATE缓冲液(pH 8.0)溶解,比纯水更稳定,可螯合金属离子抑制核酸酶活性。

温度控制‌:短期存放于–20℃,长期建议–80℃冷冻,避免置于自动除霜冰箱中。

3、使用过程中的注意事项

工作液现用现配,避免在室温下长时间暴露。

操作时佩戴手套,防止外源核酸酶污染。

使用无核酸酶的离心管和枪头,确保体系洁净。


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