亲和层析常见问题全解

Strep 标签的核心优势

✅ 特异性强：一步纯化即可得到＞95% 纯度的目标蛋白，杂带极少

✅ 温和保活：纯化条件温和，完美保留蛋白的生物活性和空间结构

✅ 小标签无需去除：8 aa 的短标签一般不影响蛋白折叠和功能，纯化后不用酶切

✅ 全系统兼容：适配原核、酵母、昆虫、哺乳动物细胞等几乎所有表达系统

✅ 无金属干扰：替代金属螯合层析，避免金属离子对敏感蛋白的影响

三、Strep 标签纯化：产品、缓冲液与常见问题

1. 可用产品

Cytiva 在售的 Strep 填料 / 预装柱均基于Strep-Tactin XT 配基：

能同时结合 Strep（II）标签和 Twin-Strep 标签，对 Twin-Strep 的亲和力达 pM 级别

耐 6 M 尿素或 4 M 盐酸胍，可用于变性条件下的蛋白纯化

也能结合生物素标记的蛋白或其他生物大分子

2. 推荐缓冲液

结合缓冲液：中性缓冲液（如 Tris-HCl、磷酸盐、HEPES，20 mM，pH 7.0-8.0），可选加 1 mM EDTA（辅助蛋白释放，纯化金属螯合蛋白时可省略）

洗脱缓冲液：含生物素的缓冲液（利用生物素竞争洗脱结合的目标蛋白）

3. 高频问题解决

生物素难溶解：生物素仅在碱性条件下充分溶解，溶解时需用 NaOH 逐步调 pH 至～8，边加边监测 pH 值

蛋白难以洗脱：

1,确认洗脱缓冲液是否现配现用

2,优化缓冲液：提高盐浓度或添加少量去垢剂

3,改变洗脱方式：从步级洗脱改为线性梯度洗脱

4,极端情况可尝试温和变性条件洗脱（需注意保护蛋白活性和配基稳定性）

柱子再生：日常用 50 mM NaOH 清洗 3 分钟，再用结合缓冲液冲洗；严苛清洗可用≤500 mM NaOH、6 M 尿素或 4 M 盐酸胍

四、蛋白难溶易成包涵体？MBP 标签是促溶神器

痛点

很多目标蛋白表达后易形成不溶性包涵体，溶解度极低，无法正常开展纯化实验。

解决方案

选择MBP（麦芽糖结合蛋白）标签—— 它是经典的促溶标签，能显著提高目标蛋白的表达水平和溶解度，促进蛋白正确折叠，大幅降低包涵体形成的风险。

⚠️ 注意：MBP 分子量约 42.5 kDa，属于大分子标签，纯化后通常需要酶切去除；去除标签后，要持续关注目的蛋白的稳定性。

五、MBP 标签纯化：产品、缓冲液与避坑指南

1. 可用产品

Cytiva 的Dextrin Sepharose HP是 MBP 标签纯化的优选：

平均粒径 34 µm，颗粒均匀，能提供高结合载量和尖锐的洗脱峰

有 25 mL/100 mL 散装填料，以及 1 mL/5 mL 预装柱，适配不同实验规模

采用麦芽糖温和洗脱，完美保留蛋白的天然活性，甚至可纯化完整的蛋白质复合物

2. 推荐缓冲液

中性缓冲液（Tris-HCl、磷酸盐、HEPES 等，20 mM，pH 7.0-8.0）

盐离子浓度：100-500 mM NaCl

洗脱：用麦芽糖溶液温和洗脱结合的 MBP 标签蛋白

3. 避坑指南

❌ 禁止添加 10% 以上甘油、非离子去垢剂（如 Tween 20、Triton X-100）：0.25% 的 Tween 20 会让蛋白结合效率降至 5% 以下

✅ 还原条件下可添加 1 mM DTT，不影响结合效率

⚠️ 再生用 0.1% SDS 清洗时，4℃下 SDS 易析出，需注意避免沉淀堵塞柱子

六、优宁维为您提供完整亲和层析解决方案

优宁维作为 Cytiva 授权代理商，可提供Strep 标签、MBP 标签相关的全系列纯化产品（包括填料、预装柱等），同时为您：

免费选型指导：根据实验需求推荐最合适的标签和产品

缓冲液优化：协助调整结合 / 洗脱缓冲液配方，提升纯化效果

问题排查：解决杂带多、洗脱难、蛋白沉淀等各类实验难题

不管你是刚入门的科研新手，还是需要优化纯化工艺的资深研究者，都能在这里找到高效的解决方案。