外泌体：细胞间的纳米信使与高效纯化方案

一、什么是外泌体？

外泌体是由细胞主动分泌到胞外环境中的微小囊泡，直径通常在 30-150 nm 之间。它们就像细胞派出的 “快递包裹”，内部装载着来自母细胞的蛋白质、核酸（mRNA、miRNA 等）和脂质等 “货物”，并将这些信息传递给邻近或远处的靶细胞，从而调控细胞的增殖、分化、免疫应答等多种生理过程。

在疾病状态下，外泌体的 “货物” 组成会发生显著改变，使其成为极具潜力的液体活检标志物，为癌症、神经退行性疾病等的早期诊断和预后评估提供了全新的视角。

二、外泌体研究的核心挑战：如何 “抓” 到它们？

尽管外泌体的研究前景广阔，但要深入探索它们的功能，首先必须解决一个核心问题：如何高效、高纯度地从复杂的生物样本（如血液、细胞培养上清）中分离出完整的外泌体？

传统的 “金标准” 方法是超速离心法，但它存在明显的短板：

耗时耗力：整个过程需要数小时，甚至过夜，难以满足高通量研究的需求。

纯度不足：容易共沉淀蛋白质聚集体等杂质，影响后续实验结果的准确性。

操作复杂：对仪器和操作人员要求高，重复性难以保证。

这些瓶颈严重制约了外泌体研究的发展，科研人员迫切需要一种更高效、更可靠的纯化方案。

三、突破瓶颈：膜亲和技术带来的纯化革命

QIAGEN exoEasy Maxi Kit 采用创新的膜亲和自旋柱技术，为外泌体纯化提供了全新路径：

核心原理：不依赖外泌体的特定表面标志物，而是利用其通用生化特征，通过膜亲和作用特异性捕获胞外囊泡（EVs），同时有效去除杂蛋白和非囊泡颗粒。

实验流程：仅需 25 分钟即可完成纯化，操作简便且支持多样本平行处理：

1,样本预处理：血液样本经离心分离血浆 / 血清，再通过 0.8 μm 滤膜过滤，去除细胞碎片和大颗粒杂质。

2,柱结合：过滤后的样本与 Buffer XBP 混合，上样至 exoEasy 膜亲和柱，EVs 被特异性结合。

3,洗涤与洗脱：用 Buffer XWP 洗涤去除未结合杂质，再以 Buffer XE 洗脱，得到高纯度 EVs。

1. 功能完整性：靶细胞摄取实验（图一）

为验证纯化后 EVs 的生物学活性，研究人员进行了细胞摄取实验：

实验设计：用 BODIPY 标记 exoEasy 纯化的 EVs，与 HEK 293T 细胞共孵育；对照组仅加入等量游离染料。

结果：标记的 EVs 能被靶细胞高效摄取（红色荧光信号），而对照组无明显信号，证明纯化后的 EVs 结构完整且具备正常的生物学功能。

2. 纯度保障：蛋白标志物分析（图二）

通过 Simple Western 自动化蛋白分析，评估 EVs 与杂蛋白的分离效果：

实验设计：对比血浆、柱流穿液、EV 洗脱液中 EV 标志物（Flotillin-1）和非 EV 标志物（ApoA1，HDL 相关蛋白）的分布。

结果：EV 标志物 Flotillin-1 在 EV 洗脱液中显著富集，而非 EV 标志物 ApoA1 被有效去除，说明纯化过程能精准分离 EVs 与杂蛋白，保障样本纯度。

3. 结构均一性：电镜对比（图三）

扫描电镜（SEM）对比超速离心和 exoEasy 纯化的 EVs：

实验设计：在 20,000× 放大倍数下，观察两种方法纯化产物的结构特征。

结果：两种方法均能得到 50–200 nm 的囊泡结构，但超速离心产物中存在大量非囊泡杂结构；而 exoEasy 洗脱的囊泡更均一，无明显杂结构，纯度优势显著。

四、科研利器：优宁维代理的 exoEasy Maxi Kit (20)

对于致力于外泌体研究的科研人员，优宁维提供了由 QIAGEN 原厂生产的 exoEasy Maxi Kit (20)，作为高效可靠的实验工具：

产品名称：exoEasy Maxi Kit (20)

货号：76064

官方链接：https://www.univ-bio.com/exoeasy-maxi-kit/76064.html

核心优势

高效快速：25 分钟完成纯化，大幅提升实验效率。

大样本兼容：支持 4 ml 血浆 / 血清或 32 ml 细胞培养上清，满足多样本需求。

功能完整：纯化的 EVs 结构完整，可直接用于细胞摄取、标记等功能实验，以及蛋白、核酸提取等生化分析。

标准合规：符合 MISEV 指南，支持 EV 蛋白的标准化表征，可与 Simple Western 平台无缝对接。

五、常见问题解答（FAQ）

1,exoEasy Maxi Kit 纯化的是外泌体还是所有胞外囊泡？

答：该试剂盒纯化的是样本中所有的胞外囊泡（EVs），包括外泌体，这对于研究细胞间的整体通讯网络是有利的。

2,为什么纯化前需要对样本进行预过滤？

答：预过滤（0.8 μm）可以去除细胞、细胞碎片和凋亡小体等大颗粒，避免堵塞纯化柱，同时保证最终产物的纯度。

3,纯化后的 EVs 可以用于哪些下游实验？

答：可用于细胞摄取、标记等功能实验，以及蛋白 / 核酸提取、物理表征（NTA、TRPS）、电镜观察等分析。

4,如何保证 EVs 的结构和功能完整性？

答：exoEasy 采用温和的膜亲和技术，不破坏囊泡结构，细胞摄取实验和电镜结果已验证其完整性。