多肽合成工艺流程简单分享

虽然多肽固相合成书籍全面讲解了多肽合成工艺的流程和方法。但往往在发表文献的时候针对某个特定的多肽合成提供工艺方案的时候，如果不是自己合成，难免是发表文献的道路上一个绊脚石。而往往一家多肽合成公司赖以生存的技术便是自身的合成工艺流程，是不轻易免费赠送。考虑至此，小编分享我司简单的合成工艺流程分享，一起学习，如有问题，欢迎大神指正。

举例：

1.1）肽序列：

[Cys-Gly-******-Glu-Gly-Ala-Glu-Ala-Lys(Ac)-Pro-Trp-Tyr-Cys]

1.2）工艺流程图：

多肽合成工艺流程图

1.2.1）直线肽合成：

1.2.2）多肽的裂解

1.2.3）多肽的氧化纯化及冻干

1.3) 制备工艺描述：

采用固相有机合成法，利用Fmoc-保护氨基酸策略，SPPS固相合成技术，合成直链肽，裂解，氧化，纯化既得目标产物。

1.4）合成工艺描述：

固相合成：

用Wang Resin(1.0 mmol/g) S=0.3mmol/g，采用Fmoc-工艺，按下列程序表4.1先接Fmoc--Cys（Trt）-OH Wang resin, 再按上述肽序列,以表4.2方法从C端向N端（从右到左）依次缩合氨基酸链接，直到直线肽A1-A17 缩合完，得到树脂肽。

表4.1第一个氨基酸缩合（程序表1）

表4.2 AA2-AA17，（程序表2）

替代度合成：R-01Fmoc-Cys（Trt）-OH、R-02Wang resin；

依次偶联下列氨基酸：A-03Fmoc-Tyr(tBu)-OH；A-04Fmoc-Trp(Boc)-OH；

A-05Fmoc-Pro-OH；A-06Fmoc-Lys（Ac）-OH；A-07Fmoc-Ala-OH；A-08Fmoc-Glu(OtBu)-OH；A-09Fmoc-Ala-OH；A-10Fmoc-Gly-OH A-11Fmoc-Glu(OtBu)-OH；A-12***；A-13***；A-14***；A-15***；

A-16***；A-17Fmoc-Gly-OH；A-18Fmoc--Cys（Trt）-OH；将肽树脂洗涤转移出干燥至恒重,待裂解。

肽树脂裂解：

裂解试剂的配制：按体积为1g肽树脂比15ml±2ml计算裂解试剂用量：

TFA:H2O:EDT:Tis =95:1:2:2 依次将所需裂解试剂H2O，TFA，EDT，TIS于裂解反应瓶，裂解试剂温度控制在0～10℃；裂解试剂在搅拌下加入肽树脂中，待体系温度稳定后；再温控在20～25℃搅拌反应2小时。

将裂解液滤出，采用5倍浓缩液体积量的冰乙醚将其沉淀，滤出沉淀物并于室温减压干燥，得粗品。

氧化

将粗品研细，准备纯化水，在搅拌下缓慢加入研细粗品，同时滴加乙腈水溶液当粗品完全溶解后，滴加稀氨水，使溶液的PH值调到7.5-8，每半个小时去样送QC打质谱，判断是否氧化完全

纯化冻干

将氧化完全的样品，用0.45um的微孔滤膜过滤；粗品纯化采用岛津半制备并用5cm，10um，C-18柱填料，在常温下用合适梯度进行分离纯化，收集目标产物，分析检测，归类。杂质纯度要求≥97%，将不合格目标物收集，用2cm，5um，C-18柱用合适梯度再次进行分离纯化，将合格主峰减压冷冻干燥，得到粉末状杂质。