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发布人:上海源叶生物科技有限公司
发布日期:2021/11/26 11:35:35
1. 多肽纯度和多肽含量的区别
在我们使用多肽的过程中,我们经常会遇到多肽纯度和多肽含量这两个指标,而很多小伙伴可能会有这样的疑问,为什么我们的多肽纯度是95%,但是肽含量却只有80%呢?因为,这个是两个完全不同的概念。
多肽纯度:多肽的纯度是指使用HPLC分析法在214nm(214nm是肽链的吸收波长)处检测到的目标多肽的含量;
多肽含量:是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比;
多肽的纯度是指使用HPLC分析法在214nm(214nm是肽链的吸收波长)处检测到的目标多肽的含量;除了目标多肽外,HPLC还可以检测到的杂质包括:缺失序列(缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列),截断序列(加保护过程中产生的序列)以及脱保护不完全序列(产生于整个合成过程或最后的裂解过程)等;但是,HPLC检测不到水和残留的盐份如三氟乙酸盐,醋酸盐等,而在多肽合成过程中,多肽是通过三氟乙酸将肽序从树脂上切割下来的,而且在纯化过程中也会产生少量的TFA,因此,多肽游离的氨基末端和其他侧链如Arg、Lys、His都可生成少量TFA杂质;还有一个就是水分,多肽通常采用冻干法脱水,即使如此,水也会因共价结合的能力不同而不同程度地存在着,因此,通常交付的多肽中,通常都含有TFA盐和微量的水分,而这些都是HPLC检测不出来的,因此,导致了肽含量和肽纯度的不同。
我们知道,多肽纯度是用HPLC分析法检测得到的,那么肽含量又是如何检测的呢?通常,肽含量通过氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中,对计算肽的浓度是很重要的。
2. DMSO在多肽溶解中的使用及细胞毒性耐受建议
在我们溶解多肽的时候,经常会遇到一些疏水性序列,这就导致了多肽很难以我们想要的浓度溶解于水中,这个时候,我们可以考虑使用DMSO。
DMSO(二甲基亚砜)是一种含硫有机化合物,分子式为(CH3)2SO,常温下为无色无臭的透明液体。DMSO作为冷冻保护剂经常应用于细胞库。在细胞冷冻过程中,DMSO可防止胞内/胞外晶体的形成,其工作浓度为10%。DMSO通常可与盐或血清白蛋白结合。
疏水性多肽可以很容易地溶解在DMSO中。但DMSO可增加细胞的通透性,若多肽溶解于DMSO中则会对细胞产生毒性作用。高浓度的DMSO绝不可应用于细胞培养中。这个时候,我们可以考虑控制溶液中DMSO的溶度。通常,浓度为5%的DMSO即可让细胞膜溶解。大多数细胞株可以容忍0.5% DMSO,少许可以容忍1%的浓度,而不表现出严重的细胞毒性。然而原代细胞培养对其更敏感。所以如果是用原代细胞做剂量/反应曲线(可行性),其浓度应低于0.1%。
下面是我们对于细胞对DMSO毒性耐受性的一些经验:
• 对几乎所有的细胞来说,浓度为0.1%DMSO是安全的。
• 广泛被用于细胞培养的DMSO终浓度为0.5%,不会引起细胞毒性。
• 虽然对部份细胞来说,1%DMSO也不会产生细胞毒性,但我们推荐0.5%。
• 也有5%DMSO成功地应用于某些细胞的案例。
• 始终保持终浓度在0.5%,但储存时可200倍高浓度溶于100%的DMSO中。
对于某些疏水性非常高的多肽,可先尝试将其溶解在少量的DMSO(30-50ul,100%)中,然后慢慢 (一滴一滴地)将其添加到不断搅拌的水溶液如PBS或其他想要的缓冲液中,直至理想浓度。如果滴加过程中,肽溶液开始变浑浊,说明已经达到了溶解极限。另外,还可以尝试使用超声波帮助多肽溶解。
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