上海惠诚生物HEK293 瞬转表达培养基

发布人：上海惠诚生物科技有限公司

发布日期:2025/2/10 19:10:55

上海惠诚生物提供的HEK293 瞬转表达基础培养基（Basal Medium）与补料培养基（Feed Medium）是完全化学成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何动物来源的成分，适合于不同亚型 HEK293 细胞的高密度悬浮培养，可实现重组蛋白和抗体的高水平表达：培养 5 天表达量在200mg/L 左右，7 天表达量 500mg/L 左右，部分可达 1g/L 以上。

上海惠诚生物提供的HEK293 瞬转表达培养基已完成美国 DMF 登记（DMF039790），更有力的支持客户需求。

HEK293 细胞培养基产品描述

▼

▲

名称

备注

谷氨酰胺

葡萄糖

生长因子

适用细胞

HEK293 CD05

初始培养基

含

6 g/L

不含

Expi293F 等

HEK293 FM01AB

补料培养基

不含

60g/L

不含

HEK293 enhancer

分泌性蛋白表达增强剂

不含

PEI

转染试剂

0.5mg/mL

推荐使用说明

▼

▲

步骤

使用方法

关键参数汇总

转染时细胞密度：3~5e6 cells/mL, DNA: 1.3mg/L, PEI:4mg/L

细胞传代

0.3 e6 cells/mL 接种，3 天传代一次，当细胞倍增时间不低于对照培养基时认为细胞完全适应新培养基，进入下一步骤

转染前一天

细胞密度调整到~2 e6 cells/mL 左右

质粒与 PEI 预处理

以 20mL 培养体积为例（其他培养体积，相关试剂需要按体积折算）

1：取 160uL Trans PEI (母液是 0.5mg/mL),加入 1mL HEK293 CD05 培养基混合均匀；

2：像 1）中混合液体中加入 26ug 的质粒（即质粒用量 1.3mg/L)，混合均匀；

3: 静止 15~20min

转染

1：用新鲜培养基调整细胞密度至 3~5 e6cells/mL (很重要）；

2：缓慢滴加上述 PEI 与 DNA 的混合物，并摇动摇瓶使混合物均匀分散；

3：转染当日记为 Day0，放入 37℃摇床中，完成转染；

补料培养

1：转染后~24h 内补加 0.5%的 HEK293 enhancer （仅此一次，且只分泌性蛋白或抗体需要添加，膜蛋白无需加 HEK293 enhancer）和 7%的 HEK293 FM01AB；

2：Day4 再补加一次 7%的 HEK293 FM01AB 和 3g/L 的葡萄糖（如培养时间≤5 天，此步忽略）；

3：活力≤70%即可培养结束或其他指定培养基时间

温度及其他参数

1：温度 37℃，不降温

2：摇床转速 120rpm, 50mm 振幅，5-8% CO2；

产品运输及存储

运输：常温或冷链运输；

存储：2~8℃，干燥、避光保存；

有效期：基础培养基干粉：2 年；

基础培养基液体：1 年；

补料培养基干粉：2 年；

补料培养基液体：1 年（开封后建议在 3 个月内使用完）。

应用范围

上海惠诚生物生物提供的培养基可用于 HEK293 细胞冻存、复苏、传代、高密度强化工艺培养及灌流培养，可

实现细胞快速生长，维持细胞高活率及蛋白该表达。

使用指南

细胞冻存

1．准备处于对数生长期状态较好的细胞，且细胞活率在 90%以上；

2．检测活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，计算最终细胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；

3．准备好所需的冻存培养基：90%基础培养基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；

4．设置离心力 200×g，离心 5 min，用冻存培养基重新悬浮细胞至冻存体积；

5．将悬浮细胞等分保存至适宜规格的细胞冻存管中；

6．将细胞冻存管置于程序降温盒中，按照降温标准进行降温；

7．将细胞转移到液氮罐中保存。

细胞复苏

1．提前打开水浴锅，并设置温度至 36.5℃~37.0℃；