上海晶风生物科技有限公司

 

过氧化氢（H₂O₂）检测试剂盒(硫酸钛比色法)

一、产品简介：

过氧化氢(H₂O₂)是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解，H₂O₂不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。生命体内积累的H₂O₂是由一些氧化物催化超氧阴离子发生氧化还原反应而形成，H₂O₂相对超氧阴离子性质稳定，但其存在可以直接或间接导致细胞膜脂质过氧化损害，加速细胞的衰老和解体，H₂O₂也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。

雅吉生物过氧化氢(H₂O₂检测试剂盒(硫酸钛比色法)其检测原理是H₂O₂与硫酸钛反应生成的过氧化物-钛复合物黄色沉淀，溶解于强酸中，其黄色深浅与过氧化氢浓度在一定范围内呈线性关系，可通过比色法检测412nm处吸光度，主要用于检测植物组织、血清、血浆等样品中过氧化氢(H₂O₂)含量。该试剂盒仅用于科研领域不适用于临床诊断或其他用途。

 

二、产品组成：

 

三、自备材料：

1、蒸馏水、丙酮

2、匀浆器或研钵

3、低温离心机

4、分光光度计、比色杯

 

• 操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品︰

①植物样品∶取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取5g ，加入5ml预冷的丙酮，在冰浴条件下迅速匀浆或研磨，4℃ 12000g离心20min，收集上清液，测量提取液总体积，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品︰血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，4℃保存，用于过氧化氢的检测。

③高活性样品∶如果样品中含有较高浓度的过氧化氢，可以使用丙酮进行恰当的稀释。

2、配制10mM H₂O₂标准溶液∶由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度，该试剂盒提供的H₂O₂基液的H₂O₂浓度约为1M，用蒸馏水稀释100倍，使H₂O₂浓度约为10mM，蒸馏水调零，分光光度计测定A₂₄₀，根据公式H₂O₂浓度(mM)=22.94×A₂₄₀计算出H₂O₂基液中H₂O₂的实际浓度，再用丙酮稀释H₂O₂基液配制10mM H₂O₂丙酮标准溶液(一般情况下新配制的10mM H₂O₂基液A₂₄₀为0.4~0.45，3个月以后A₂₄₀为0.35~0.42)。

按下表依次稀释(常用浓度0.3-3mM,即1~5号)∶

 

3. 配制硫酸钛溶液∶0.3g 硫酸钛加入 6ml蒸馏水中，即为5%硫酸钛溶液，4C保存。
4. H₂O₂加样∶按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡;如果样品中的H₂O₂浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。

 

 

5. H₂O₂测定∶混匀，室温放置5min ， 12000g离心15min，弃上清液，留取沉淀，如有必要可加入预冷丙酮反复洗涤沉淀物，向各管的沉淀中加入2ml酸性基液，摇动，使沉淀完全溶解;比色杯光径1cm，空白管调零，分光光度计测定412nm处各标准管、测定管的吸光度，如果没有分光光度计，亦可用酶标仪检测。

 

五、计算:以系列丙酮-H₂O₂标准(0.3、0.5、0.8、1、3、5、8 mM)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程;以测定管吸光度代入回归方程求得待测样品中H₂O₂的浓度。

组织样品H₂O₂(mmol/g)=(C₀×V_T×N)/m

液体样品H₂O₂ (mmol/L)=C₀×N

式中:

Co=根据待测样品的吸光度在标准曲线求得H₂O₂浓度(mM)

V_T=待测样品的总体积(L)

m=样品质量(g)

N=样本稀释倍数

六、注意事项:

1、该试剂盒亦可用酶标仪进行检测，但检测的样本数相应增加。

2、加入碱性基液、硫酸钛溶液时，应直接加入至溶液中，不要粘到管壁。

3、过氧化物-钛复合物黄色沉淀溶解于酸性基液时需要一段时间，需完全溶解，否则有可能影响测定结果。

4、H₂O₂基液和碱性基液应严格密闭保存，避免挥发，否则效率会下降。

5、H₂O₂基液和酸性基液有一定腐蚀性，请小心操作。

6、硫酸钛溶解于水后应尽早使用，如暂时不用，可短期放置4℃冰箱保存﹔亦可用分析天平称取一定量的粉剂，配置5%的浓度即可。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

七、 有效期∶12个月有效。

附录∶标准曲线制作: 雅吉生物在室温条件下按说明书操作，对系列标准进行吸光度的测定，其吸光度及标准曲线如下(仅供参考)，我们采用H₂O₂标准(0.1、0.3、0.5、0.8、1、3.5、8 、10mM)绘制标准曲线(标准品浓度过高或过低都有可能影响标准曲线的准确性)∶

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

注意:H₂O₂浓度低于0.3mM基本无色，0.3~1mM为黄色，3~10mM为橙黄色，效果参考如下。