禽流感病毒H9亚型（间接）ELISA抗体检测试剂盒使用说明书

禽流感病毒H9亚型（间接）ELISA抗体检测试剂盒使用说明书

【名  称】

通 用 名  禽流感病毒H9亚型ELISA抗体检测试剂盒

英 文 名  ELISA Kit For H9 Subtype Avian InfLuenza Virus Antibodies

汉语拼音  QinLiuganbingdu H9 Yaxing ELISA Kangtijiance Shijihe

【主要组分与含量】

【作用与用途】  用于禽流感病毒H9亚型抗体的检测。

【用法与判定】

1  用法

1.1  样品准备  取动物全血，待血液充分凝固后，4000r/min离心10分钟，收集上清。要求血清清亮，无溶血。

1.2  洗涤液配制20倍浓缩洗涤液使用前，将20倍浓缩洗涤液恢复至20～25℃，并摇动使沉淀溶解（最好在37℃水浴锅中加热5～10分钟），然后用蒸馏水或去离子20倍稀释（例如：10mL的浓缩洗涤液加上190mL纯水），混匀，稀释好的洗涤液在2～8℃下可以存放7日。

1.3  待检血清的稀释  待检血清在血清稀释板中按10倍稀释（例如10μL血清加入到90μL样品稀释液中，混匀，备用）。阴、阳性对照直接使用，无需稀释。

1.4  操作步骤

1.4.1  取抗原包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），先用1×洗涤液洗涤抗原包被板2次（300μL/孔），拍干后在每孔加入稀释好的样本100μL；另外设阳性对照（根据样本种类选取对应的对照品）、阴性对照各2孔，100μL/孔。置37℃孵育30分钟。

1.4.2   弃去板中液体，每孔加入稀释好的洗涤液300µL，不必静置，弃掉孔中洗涤液，重复洗涤共计洗板5次，最后一次拍干。

1.4.3  每孔加入100μL酶标记物，轻微振荡混匀。置37℃下孵育30分钟。

1.4.4  弃去板中液体，洗涤5次，方法同1.4.2。

1.4.5  每孔加底物显色液100µL，室温（20~25℃）避光显色10分钟。

1.4.6  每孔加终止液50µL。10分钟内用酶标仪测定并记录各孔在450nm波长处的吸光度（OD）值（测定前轻轻振匀，勿溢出）。

2  判定

2.1  成立条件  在酶标仪上测各孔的OD_450nm值。试验成立的条件是：阴性对照孔平均OD_450nm值应＜0.3，阳性对照孔平均OD_450nm值应＞0.5。

2.2  判定标准  

    S为样品孔OD_450nm值，P为阳性对照孔平均OD_450nm值，N为阴性对照孔平均OD_450nm值，计算样品S-N/P-N值。若S-N/P-N值≥0.5时判为阳性；若S-N/P-N值＜0.5时判为阴性。

【注意事项】

1  所有试剂使用前应平衡至20～25℃，使用完毕后返回到2～8℃保存，以便下次使用。

2  请在试剂盒规定的有效期内使用；禁止非同批试剂盒混用。

3  没有用完的抗原包被板应贮存在包装膜内，于2～8℃存放。

4  用过的材料要无害化处理，处理时遵照当地、区域以及国家法规。

5  避免TMB（底物显色液）暴露于强光，避免接触氧化剂。

6  浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。

7  严格按照操作程序，仔细地吸液、计时、充分洗涤，以获得精确的结果。

【规格】 96 孔/盒或192 孔/盒或480 孔/盒

【贮藏与有效期】  2~8℃保存，有效期为12个月。

温馨提示：抗原包被板真空包装袋若有漏气，抗原包被板仍然正常有效， 不影响实验结果，请放心使用。

仅供科研使用