RNA提取之Triizol法

在分子生物学研究中，RNA提取是非常重要的基础步骤，而提取效率和纯度直接影响后续实验的成功。Triizol试剂是一款高效、可靠的核酸提取试剂，为科研人员提供专业解决方案。

Triizol产品特点：

1、高效提取RNA

Triizol试剂基于经典的酸性酚-氯仿分离法，可从细胞、组织、植物等多种样本中快速提取高纯度的RNA。可满足多种实验需求，省时高效。

2、高纯度

提取的RNA具有极高的纯度和完整性，A260/280值通常在1.8-2.0，完全满足分子生物学实验的要求。

3、适用范围广

样本类型：适用于细胞、组织、细菌、酵母和病毒等多种样本。

下游实验：提取的核酸可直用于Northern，点杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase protectionassay，cDNA克隆，以及RT-PCR；也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的实验，保证结果的准确性和可靠性。

需要的试剂

需要的耗材

操作步骤：

1、细胞裂解

★ 组织样本

Triizol用量：每50-100mg组织加1mL Triizol，样品体积不应超过Triizol体积的10％。

（1）将动物或植物组织切成小块，在液氮中磨碎或用匀浆器匀浆处理；

（2）将研磨好的组织粉末快速转入装有1mL Triizol的2mL离心管中，在涡旋振荡器上迅速振荡混匀，置于冰上， 待所有的样品研磨完；

（3）裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。对于富含蛋白、脂肪或多糖物质的组织样品如肌肉、脂肪组织和植物结节部位等，匀浆后仍会存留有不溶物质，可于4℃ 12,000xg离心10min，然后吸取上清至一新的离心管中。

★ 细胞样本

（1）贴壁细胞：吸尽培养液，每10cm²培养面积（6孔板单孔或35mm平皿）加入1mL Triizol，用加样器吹打数次，以确保细胞完全裂解，然后转移至离心管中；

注：Triizol的使用量应由培养皿表面 积决定，而非由细胞数目决定。Triizol量不足可能导致提取的RNA中有DNA污染。

（2）悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每5-10×10⁶动植物或酵母细胞，或每1×10⁷细菌细胞加入1mL Triizol， 用加样器吹打，使其完全裂解，然后转移至离心管中。

注：添加Triizol前切勿洗涤细胞 ，以免RNA降解。必要时可以用匀浆器来裂解某些细菌或者酵母细胞。

2、液相分离

（1）裂解产物于室温放置5min，使核酸-蛋白复合物完全分离（注：此时样品可在-80℃长期保存）；

（2）每1mL Triizol加入0.2mL氯仿，盖紧管盖，剧烈振荡15s，室温放置2-3min；

（3）4℃ 12,000xg离心15min，样品会分成三层：桔黄色的下层有机相，中间层和无色的上层水相；

（4）吸取含总RNA的上层水相至一新的离心管中，吸取水相的体积为所用Triizol试剂的60％。

3、RNA回收

（1）按照每1mL Triizol的最初使用量加入0.5mL异丙醇，颠倒数次混匀，室温放置10min；

（2）4℃ 12,000xg离心10min，弃除上清，可见胶状的RNA沉淀；

（3）按照每1mL Triizol的最初使用量加入1mL 75%乙醇，颠倒数次混匀，洗涤沉淀；

（4）4℃ 12,000xg离心5min，弃除上清；

（5）室温倒置5-10min晾干或真空抽干（不要使用真空干燥离心机，以免RNA过干，难以溶解）；

（6）加入适量（如25uL） DEPC-ddH₂O或TE缓冲液，用加样器吹打数次溶解RNA；

（7）通过RNA电泳以及紫外分光光度计检测，确定RNA的浓度、纯度和完整性；

（8）所得的RNA应立即使用或适量分装后-80℃保存，避免反复冻融。

仅需几步操作，即可得到高质量的RNA，简便且高效。除Triizol(abs60154)外，Absin还有Triizol（总RNA抽提试剂盒）(abs9331)包含有RNA提取全流程的试剂。

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