精准感知细胞酸碱：RatioWorks™ PH165 NHS酯比率型pH荧光探针详解

RatioWorks™ PH165 NHS酯是一种新型荧光探针，可用于活细胞内pH值的精确检测。该探针具有pH依赖性荧光光谱特性，其独特的双激发（497nm/578nm）和双发射（594nm/654nm）设计使其成为活细胞分析的理想比率式pH检测工具。

一、RatioWorks™ PH165 NHS酯参数

Ex(nm)  463   

Em(nm)  461

分子量  581.51

溶剂    DMSO

存储条件  在-15℃以下保存，避光防潮

二、RatioWorks™ PH165 NHS酯实验流程要点

1.偶联反应：

将 RatioWorks PH165 NHS ester 与您的目标蛋白/抗体在 pH 8.0-9.0 的缓冲液（如碳酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液）中孵育。避免使用含有游离氨基的缓冲液（如Tris、甘氨酸），否则会消耗探针。

反应后，通常需要通过凝胶过滤柱（如PD-10）或透析去除未反应的游离探针。

2.细胞实验：

将标记好的复合物通过适当方式（如孵育、显微注射）引入细胞。

成像/检测：使用双通道（例如，515 nm和560 nm附近）采集荧光信号。计算两个通道的强度比（通常用560nm/515nm或类似比例），根据用已知pH缓冲液制作的标准曲线，将比值转换为具体的pH值。

三、RatioWorks™ PH165 NHS酯注意事项

储存：NHS酯对湿气敏感，应干燥保存，通常建议在-20°C下避光干燥储存，使用前恢复至室温并快速分装。

偶联条件优化：需要优化探针与蛋白的比例，避免过度标记导致蛋白失活或淬灭。

标准曲线：为获得准确的绝对pH值，必须使用离子载体（如尼日利亚菌素/莫能菌素）在含有高钾离子的缓冲液中，对细胞进行标定，建立细胞内/外的比值-pH标准曲线。

仪器校准：确保您的荧光仪器可以进行准确的比率测量。

   简而言之，RatioWorks PH165 NHS ester 是研究细胞内酸性微环境，特别是需要将pH传感能力“安装”到特定生物分子上时的强大工具。百萤生物为您提供可用于细胞pH值检测的RatioWorks™ PH165 NHS酯。